식품의약품안전처 고시 제2018-54호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

2018. 7. 13.

식품의약품안전처

식품의약품안전처 고시 제2018-54호

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

1. 개정 이유

빵류에 도포 또는 충전되는 크림의 정의를 신설하고 즉석섭취·편의식품류의 장염비브리오 규격의 단서조항을 개정하여 관련 규격의 적용을 명확히 하고자 함

현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반 함유 영‧유아 식품 등에 무기비소 기준을 신설하고 메틸수은 규격적용 대상 어류를 명확히 하며 검체 채취 및 취급방법에  ｢축산물 위생관리법｣에서 규정한 자를 포함하고자 함

식품원료 목록의 항목 명칭을 기재사항의 특성에 맞도록 개정하며, 신청인만 사용할 수 있는 ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 인정된 알룰로오스를 누구나 식품의 원료로 사용할 수 있도록 식품공전에 등재하고, 일반원료로 전환된 한시적 인정 식품원료를 합리적으로 관리할 수 있도록 한시적 기준‧규격에서 전환된 원료의 목록을 신설하고자 함

국내외에서 사용되는 농약의 잔류허용기준을 강화하여 식품 안전관리를 하고자 함

2. 주요 내용

가. 식품원료의 분류 개정[제1. 4. 2), 제2. 3. 5) (1) ③, 별표 1, 별표 2]

1) 메틸수은 규격적용을 위한 해양어류의 분류 방법 개정

2) 식품원료 목록의 항목 명칭을 개정하고 식품원료의 품목명(7품목), 이명(1품목), 학명(2품목), 사용부위(4품목), 사용조건(2품목) 명확화 및 중복된 식품원료(1품목)를 통합하여 민원인이 식품원료를 쉽게 확인할 수 있도록 개정

나. 해조류를 원료로 한 가공식품의 제조‧가공기준 신설[제2. 2. 24)]

1) 무기비소의 함량이 높은 해조류의 안전관리 필요

2) 톳과 모자반을 원료로 사용 시 무기비소 저감화 과정을 거치도록 제조‧가공기준 신설

3) 식품의 제조·가공 중 무기비소를 제거할 수 있도록 기준을 신설하여 식품의 안전관리 강화

다. 가공식품에 무기비소 기준 신설[제2. 3. 5) (2) ④]

1) 무기비소 위해 우려가 큰 현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반 함유 영‧유아 식품 등에 무기비소 안전관리 강화 필요

2) 무기비소에 민감도가 큰 영·유아를 대상으로 한 식품에 무기비소 기준 신설

3) 무기비소 오염도가 높은 현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 원료로 하는 식품에 무기비소 기준 신설

4) 우리나라 국민의 식품섭취 패턴 변화를 반영하여 중금속 안전관리 강화

라. 한시적 기준‧규격에서 전환된 원료의 목록 신설 및 원료 추가[별표 3]

1) ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣ 에 따라 식품원료로 인정된 원료 중 일반식품원료로 등재되는 원료는 [별표 3] “한시적 기준‧규격에서 전환된 원료”의 목록을 신설하여 합리적으로 관리

2) 한시적으로 인정된 원료인 알룰로오스를 [별표 3] “한시적 기준‧규격에서 전환된 원료”의 목록에 추가하여 인정받은 자 외에도 모든 영업자가 사용할 수 있도록 확대

3) 식품원료 판단기준을 명확히 하고, 한시적 인정 식품원료에서 일반 식품원료로 기 전환된 식용곤충 4종을 [별표 3] “한시적 기준‧규격에서 전환된 원료”의 목록에 등재하여 민원인이 보다 쉽게 식품원료를 사용할 수 있도록 개정

마. 미생물 규격이 적용되는 빵류의 크림 정의 신설 및 즉석섭취·편의식품류의 장염비브리오 규격 개정[제4. 1. 5) (7), 제4. 1. 5) (8), 제4. 22. 22-2 5) (6)]

1) 빵류에 충전 또는 도포하는 크림의 정의를 신설하고 미생물 제어 공정이 있는 경우 규격 적용을 제외할 수 있도록 개정

2) 즉석섭취식품, 신선편의식품 중 교차오염의 우려가 없고 가열에 의한 미생물 제어 공정이 있는 경우는 장염비브리오 규격 적용을 제외할 수 있도록 예외 규정 신설

바. 미생물 규격 적용 문구 명확화 등[제4. 15. 15-7 5) (8), 제5. 5]

1) 기타 농산가공품류의 대장균 적용 대상 품목의 명확화

2) 식품접객업소의 접객용음용수에 식중독균 규격에 적용되는 대장균 시험법의 막여과법 추가

사. 검체의 채취 및 취급방법 개정[제6. 1, 제6. 3. 1), 제6. 3. 5), 제6. 3. 10), 제6. 4. 2), 제6. 4. 4) (5) ➀]

1) 식품과 축산물의 기준·규격이 통합된 ｢식품의 기준 및 규격｣에 따른 검체채취자의 범위 확대 필요

2) ｢축산물 위생관리법｣에서 규정한 검체채취자를 추가

3) 식품 및 축산물 검체의 채취자 범위 명확화

아. 일반시험법 개정 등[제4. 1. 6) (6), 제4. 2. 2-3 6) (1), 제7. 4.1.2 가, 제7. 4.3, 제7. 4.4.1, 제7. 4.5.1 다, 제7. 4.6, 제7. 4.7.1 3), 제7. 4.7.2, 제7. 4.8.1 가, 제7. 4.11, 제7. 4.17, 제7. 4.18, 제7. 4.20, 제7. 4.21, 제7. 4.25, 제7. 4.26, 제7. 6.1.3, 제7. 6.6.4, 제7. 6.8.3, 제7. 6.10.2, 제7. 6.10.6, 제7. 9.1.5, 제7. 9.2.9, 제7. 10.1, 제7. 10.2]

1) 대장균, 대장균군 정성시험법 중 발효관 가스발생 여부 확인단계가 중복되어 있어 간소화하여 개선

2) 바실러스 세레우스, 크로노박터 분리배양 배지 추가

3) 클로스트리디움 보툴리눔의 독소확인시험, 크로노박터 시험법 중 분자생물학적 시험법 추가

4) PCR 검출감도가 향상된 프라이머를 사용할 수 있도록 노로바이러스 시험법 개정

5) 얼음류 대장균군 규격 개정에 따른 시험법 개정

6) 여시니아 엔테로콜리티카 증균배양 기간을 10일에서 2일로 단축

7) 미생물시험법 중 시험용액의 제조방법, 반응온도 등 문구 개정

8) 유음료가 가공유로 통합 개정, 알가열성형제품이 알가열제품 등으로 개정됨에 따라 세균수, 대장균군의 최확수법 적용대상에 개정사항 반영

9) 유전자변형식품 추가 승인 품목 시험법 신설

10) 과자류, 빙과의 개별 세균수 시험방법 중 중복 기재된 시험용액 제조법 문구 정비

11) 세균발육시험법 적용 대상을 장기보존식품 중 통‧병조림식품 및 레토르트식품으로 명확화

12) 가공유의 무지유고형분 함량 시험시 당분함량을 제외하도록 개정

13) 농축우유의 유고형분에서 유당이 제외되지 않도록 당분 시험법 개정

14) 식품 중 무기비소 시험법 개정

15) 식품 중 아플라톡신(B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A, 제랄레논, 푸모니신(B1, B2) 동시분석법 신설

16) 방사선 조사식품 확인시험의 용어 및 시험법 서술양식의 통일

17) 식염의 불용분 시험법 개정됨에 따라 종전의 불용분 시험용액으로 시험하던 황산이온과 염산이온 시험용액 조제방법 개정

18) 사분 규격이 불용분과 통합 관리되어 삭제됨에 따라 사분 시험법 삭제

19) 시험법 오기 및 누락된 사항을 정정함으로써 시험결과의 정확성 및 신뢰도 향상

20) 효소식품의 α-아밀라아제와 프로테아제의 역가 계산법 개정

자. 식품첨가물 기준‧규격 개정사항 반영 및 전부개정사항 오기 정정 등[제2. 3. 5) (9), 제2. 3. 15), 제7. 6. 6.6.2]

1) 소브산 등 식품첨가물 기준‧규격 개정사항을 반영하여 식품공전 중 첨가물 사용 기준 개정

2) 원유의 가수‧가염 여부 판단을 위한 검사 항목 정정

3) 위화물 시험법 중 식염 시험법 추가

차. 농산물 중 농약 잔류허용기준 개정[별표 3 중 (99) 이사-디, (164) 펜발러레이트, (169) 펜코나졸, (259) 피리메타닐]

1)「농약관리법」에 신규 등록된 농약의 안전관리 및 수입 농산물에 농약 잔류허용기준 설정 신청에 따른 관련 기준 신설 및 개정 필요

2) 이사-디 등 농약 4종의 농약 잔류허용기준 개정

3) 농산물에 농약 잔류허용기준을 합리적으로 개정하여 국민에게 안전한 식품 공급

3. 기타 참고사항

가. 관계법령 : 「식품위생법」 제7조제1항

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당사항 없음

라. 기    타

1) 행정예고

가) 공고 제2017-473호, 2017. 12. 28.(2017. 12. 28.～2018. 2. 26.)

나) 공고 제2018-139호, 2018. 4. 4.(2018. 4. 4.～24.)

2) 식품 및 축산물위생심의위원회

가) 식품위생심의위원회 위생제도분과 심의: 2018.5.24

나) 식품위생심의위원회 미생물분과 심의: 2018.6.18

다) 식품위생심의위원회 유해오염물질분과 심의: (1차)2018.3.20, (2차)2018.7.12

라) 식품위생심의위원회 잔류물질분과 심의: (1차)2017.8.18, (2차)2017.11.15

3) 규제심사

가) 국무조정실 규제심사 대상여부

① 규제심사 비대상: 제2017-3493호(2017.12.7), 제2018-947호(2018.4.2)

② 규제심사 대상: 제2017-3492호(2017.12.21)

나) 식약처 자체규제심사(2018.4.24～25, 원안의결)

다) 법제처 심사: 법령위반 및 위임범위 일탈 없음(2018.4.26.)

라) 국무조정실 규제개혁위원회 예비심사: 비중요규제(627회, 2018.5.8～11)

식품의약품안전처 고시 제2018-54호

「식품위생법」 제7조제1항에 따른 「식품의 기준 및 규격」(식품의약품안전처 고시 제2018-50호, ‘18. 6. 27.)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2018년  7월  13일

식품의약품안전처장

식품의 기준 및 규격 일부개정고시

식품의 기준 및 규격 일부를 다음과 같이 개정한다.

제1. 1. 10) 중 “[별표 6]”을 “[별표 7]”로 한다.

제1. 4의 2)의 어류 중 해양어류의 1)～3)을 삭제하고 다음과 같이 한다.

가오리, 가자미, 갈치, 강달이, 고등어, 꽁치, 날치, 넙치(광어), 노래미, 농어, 대구, 도루묵, 도미, 망둑어, 멸치, 명태, 민어, 박대, 방어, 밴댕이, 뱅어, 병어, 복어, 볼기우럭, 조피볼락(우럭), 볼락, 붕장어, 삼치, 서대, 숭어, 쌍동가리, 양미리, 임연수어, 전갱이, 전어, 정어리, 조기, 준치, 쥐치, 청어, 홍어, 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 먹장어, 흑점샛돔(은샛돔), 은민대구, 은대구, 다랑어류(참다랑어, 남방참다랑어, 날개다랑어, 눈다랑어, 황다랑어, 백다랑어, 가다랑어, 점다랑어), 몽치다래, 물치다래, 돛새치, 청새치, 황새치 등

제2. 1. 2) (8)을 다음과 같이 한다.

(8) 한시적 기준‧규격에서 전환된 원료

① ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 식품원료로 인정된 후 식품공전에 등재되는 ‘한시적 기준‧규격에서 전환된 원료’의 목록은 [별표 3]과 같다.

②  ‘한시적 기준‧규격에서 전환된 원료’로 분류된 원료는 명시된 제조(또는 사용) 조건을 준수하여야 한다.

제2. 1. 2) (8) ①을 제2. 1. 2) (9) ①로 하고, 다음과 같이 한다.

① ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 인정된 식품원료는 다음의 어느 하나를 충족하면 ｢식품의 기준 및 규격｣[별표3] ‘한시적 기준‧규격에서 전환된 원료’의 목록에 추가로 등재 할 수 있다.

제2. 2. 24)를 다음과 같이 신설한다.

24) 식품 제조‧가공에 원료로 사용하는 톳과 모자반의 경우, 생물은 끓는 물에 충분히 삶고, 건조된 것은 물에 불린 후 충분히 삶는 등 무기비소 저감 공정을 거친 후 사용하여야 한다.

제2. 3. 4) (1) 가. 중 “6개월 미만의 영‧유아를”을 “6개월 미만의 영아를”로 한다.

제2. 3. 4) (2) 마. 중 “6개월 미만의 영‧유아가”를 “6개월 미만의 영아가”로 한다.

제2. 3. 5) (2)의 ③ 수산물 중 어류, 냉동식용어류머리, 냉동식용어류내장의 규격을 다음과 같이 한다.

③ 수산물

대상식품	납(mg/kg)	카드뮴(mg/kg)	수은(mg/kg)	메틸수은(mg/kg)
어류	0.5 이하	0.1 이하 (민물 및 회유 어류에 해당된다) 0.2 이하 (해양어류에 해당된다)	0.5 이하 (아래 ㉮의 어류는 제외한다)	1.0 이하 (아래 ㉮의 어류에 한한다)
냉동식용 어류머리	0.5 이하	-	0.5 이하 (아래 ㉮의 어류는 제외한다)	1.0 이하 (아래 ㉮의 어류에 한한다)
냉동식용 어류내장	0.5 이하 (다만, 두족류는 2.0 이하)	3.0 이하 (다만, 어류의 알은 1.0 이하, 두족류는 2.0 이하)	0.5 이하 (아래 ㉮의 어류는 제외한다)	1.0 이하 (아래 ㉮의 어류에 한한다)

㉮ 메틸수은 규격 적용 대상 해양어류 : 쏨뱅이류(적어포함, 연안성 제외), 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 체장메기(홍메기), 블랙오레오도리(Allocyttus niger), 남방달고기(Pseudocyttus maculatus), 오렌지라피(Hoplostethus atlanticus), 붉평치, 먹장어(연안성 제외), 흑점샛돔(은샛돔), 이빨고기, 은민대구(뉴질랜드계군에 한함), 은대구, 다랑어류, 돛새치, 청새치, 녹새치, 백새치, 황새치, 몽치다래, 물치다래

제2. 3. 5) (2)의 ④를 다음과 같이 한다.

대상식품	납(mg/kg)	비소(mg/kg)	무기비소(mg/kg)
○ 식물성유지류, 어유, 기타동물성유지, 혼합식용유, 향미유, 가공유지, 쇼트닝, 마가린	0.1 이하	0.1 이하	-
○ 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·유아용 특수조제식품	0.01 이하 [분말제품의 경우 희석하여 섭취하는 형태(제조사가 제시한 섭취방법)를 반영하여 기준적용]	-	0.1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)
○ 특수의료용도등식품(영·유아용 특수조제식품 제외), 과자, 시리얼류, 면류	-	-	0.1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)
○ 기타식품**	-	-	1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)

* 총비소 시험결과 무기비소 기준 초과 검출 시 무기비소로 시험하여 기준 적용

** 기타식품은 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영‧유아용 곡류조제식, 기타 영‧유아식, 특수의료용도등식품, 과자, 시리얼류, 면류를 제외한 모든 식품을 말한다.

제2. 3. 5)의 (3) 곰팡이독소 기준 ⑥ 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol) 규격을 다음과 같이 한다.

대상식품	기 준(㎎/kg)
곡류(옥수수 제외)	1 이하
곡류를 단순 처리한 것(분쇄, 절단 등, 다만 옥수수를 단순처리한 것은 제외)
옥수수	2 이하
옥수수를 단순 처리한 것(분쇄, 절단 등)
시리얼류	0.5 이하
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	0.2 이하
면류	0.75 이하

제2. 3. 7) (1), 제2. 3. 7) (3) 중 “[별표 3]”을 “[별표 4]”로  한다.

제2. 3. 8) (1), 제2. 3. 8) (2) 중 “[별표 4]”를 “[별표 5]”로  한다.

제2. 3. 9) (1) 중 “[별표 5]”를 “[별표 6]”으로  한다.

제2. 3. 11) 중 “6개월 미만의 영‧유아가”를 “6개월 미만의 영아가”로 한다.

제2. 3. 15) 중 “가수검사 및 가염검사”를 “가수검사”로 하고 다음과 같이 한다.

	우유(착유된 그대로의 것)	양유(착유된 그대로의 것)
가수검사	가수하여서는 아니 된다.	-

제2. 4. 16) 중 “수산물가공품”을 “기타 수산물가공품”으로 한다.

제2. 4. 25) 중 “상이한 경우 국내의 보존 및 유통온도에서”를 “상이하여 국내의 보존 및 유통온도 조건에서”로 한다.

제4. 1. 5) (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

프로피온산 프로피온산나트륨 프로피온산칼슘	2.5 이하(프로피온산으로서 기준하며, 빵류에 한한다)

제4. 1. 5) (7)과 (8)를 다음과 같이 한다.

(7) 황색포도상구균 : n=5, c=0, m=0/10g[다만, 크림(우유, 달걀, 유크림, 식용유지를 주원료로 이에 식품이나 식품첨가물을 가하여 혼합 또는 공기혼입 등의 가공공정을 거친 것을 말한다)을 도포 또는 충전 후 가열살균하지 않은 빵류에 한한다.]

(8) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/10 g[다만, 크림(우유, 달걀, 유크림, 식용유지를 주원료로 이에 식품이나 식품첨가물을 가하여 혼합 또는 공기혼입 등의 가공공정을 거친 것을 말한다.)을 도포 또는 충전 후 가열살균하지 않은 빵류에 한한다.]

제4. 1. 6) (6)을 다음과 같이 한다.

(6) 세균수

제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

제4. 2. 2-3 6) (1)을 다음과 같이 한다.

(1) 세균수

제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

제4. 7-3 5) 중 마가린의 (6) 보존료(g/kg)를 다음과 같이 한다.

유형

항목

마가린

(6) 보존료

(g/kg)

다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

데히드로초산나트륨	0.5 이하(데히드로초산으로서)
안식향산, 안식향산 나트륨, 안식향산칼륨, 안식향산칼슘	1.0 이하(안식향산으로서)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하[소브산으로서, 단 저지방 마가린은 2.0 이하]
상기(안식향산류 및 소브산류)의 보존료를 병용 사용시	1.0 이하[안식향산 및 소브산의 합으로서, 단 저지방 마가린(지방스프레드)은 안식향산 및 소브산의 합으로서 2.0 이하이며 그중 안식향산은 1.0 이하]

제4. 9-3 5) (7)을 다음과 같이 한다.

(7) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	0.6 이하(안식향산으로서, 다만, 농축과즙의 경우 소브산, 소브산칼륨 또는 소브산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소브산으로서 사용량의 합계가 1.0 이하이어야 하며, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6 이하이어야 한다. 또한 가열하지 아니한 제품은 검출되어서는 아니 된다.)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서, 농축과일즙, 과·채주스에 한하며, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 또는 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소브산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.0 이하이어야 하며, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6 이하)

제4. 10. 10-1 2) (1), 제4. 10. 10-2 2) (2), 제4. 10. 10-3 2) (1), 제4. 10. 10-4 2) (1), 제4. 10. 10-5 2) (1) 중 “방사선조사처리”를 “식품조사처리”로 한다.

제4. 12. 12-2 5) (6)을 다음과 같이 한다.

(6) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	0.2 이하(파라옥시안식향산으로서, 소스에 한한다.)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소스에 한한다. 파라옥시안식향산메틸 또는 파라옥시안식향산에틸과 병용할 때에는 소브산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 1.0 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.2 이하)
	0.5 이하(소브산으로서, 토마토케첩에 한한다.)

제4. 13-2 5) (5)를 다음과 같이 한다.

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서, 절임식품에 한함)
	0.5 이하[소브산으로서, 당절임(건조당절임 제외)에 한함]
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(안식향산으로서, 절임식품에 한함. 소브산, 소브산칼륨 또는 소브산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소브산으로서 사용량의 합계가 1.5 이하이어야 하며, 그 중 소브산으로서의 사용량은 1.0 이하)

제4. 13-3 5) (4)를 다음과 같이 한다.

(4) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서 다만, 농산물을 주원료로 한 것에 한한다)

제4. 15. 15-7 5) (8)을 다음과 같이 한다.

(8) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10(비살균 과·채가공품과 더 이상 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 비살균제품에 한한다.)

제4. 16-1, 16-2, 16-3, 16-4, 16-5의 5) (1) 중 ‘0.07 이하’를 ‘0.07 미만’으로 한다.

제4. 19-6 6) 중 종전의 ‘(3)∼(5)’를 각각 ‘(5)∼(7)’로 하고, (3)과 (4)를 다음과 같이 신설한다.

(3) 산가

제7. 일반시험법 2.1.5.3.1 산가에 따라 시험한다.

(4) 과산화물가

제7. 일반시험법 2.1.5.3.5 과산화물가에 따라 시험한다.

제4. 22. 22-2 5) (6)을 다음과 같이 한다.

(6) 장염비브리오 : 1 g당 100이하(즉석섭취식품, 신선편의식품 중 살균 또는 멸균처리 되지 않은 해산물 함유 제품에 한한다.)

제5. 5. 3)을 다음과 같이 한다.

3) 대장균

(1) 제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.8 대장균에 따라 시험한다.

(2) 접객용음용수의 대장균 검사의 경우에는 막여과법에 의하여 시료 250 mL를 여과한 후 여과지를 EMB 평판배지 위에 올려놓고 35℃에서 하룻밤 배양한다. 전형적인 집락이 확인되며 제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.8.1 대장균의 정성시험 가. 한도시험에 의하여 확인 동정한다.

제5. 5. 14) 중 후단부에 아래의 내용을 신설한다.

※ 막여과법

1. 막여과장치 및 기구

(1) 여과막

공경 0.45 μm 이하, 직경 47 mm의 막을 사용한다.

(2) 여과장치

여과막을 끼워서 여과할 수 있게 하는 장치로 멸균 가능한 것을 사용한다.

2. 시료액의 여과

멸균된 여과장치에 여과막의 격자가 그려진 면을 위로 향하게 하여 바르게 끼우고 판넬을 클램프로 고정한 후 시료액 250 mL를 무균적으로 넣어 여과한다. 여과지는 멸균 핀셋을 사용하여 제거하여 각각의 배양배지 위에 기포가 생기지 않도록 올려놓은 후 배양한다.

제6. 1.을 다음과 같이 한다.

1. 검체채취의 의의

검체의 채취는 검사대상으로부터 일부의 검체를 채취하는 것을 의미하며, 채취된 검체의 기준․규격 적합여부, 오염물질 등에 대한 안전성 검사를 실시하여 그 검사결과에 따라 행정조치 등이 이루어지게 되므로, 검사대상 선정, 검체채취․취급․운반․시험검사 등은 효율성을 확보하면서 과학적인 방법으로 수행되어야 한다. 따라서 검체를 채취하여 식품 등 시험·검사기관 또는 축산물 시험·검사기관에 검사의뢰하는 것은 중요한 의의를 가지므로 검체채취는 검체채취 및 취급방법 등에 대한 충분한 지식을 가지고 있는 자가 그 직무를 수행하여야 한다.

제6. 3. 1)을 다음과 같이 한다.

검체의 채취는 ｢식품위생법｣ 제32조 및 같은 법 시행령 제16조 또는 ｢축산물 위생관리법｣ 제13조 및 제20조의 2, 같은 법 시행령 제14조 및 제20조의 2에서 규정하는 자(이하 “검체채취자”라 한다.)가 수행하여야 한다.

제6. 3. 5) 중 “식품위생감시원이”를 “검체채취자가”로 한다.

제6. 3. 10) 중 “식품위생감시원은 ”을 “검체채취자는”로 한다.

제6. 4. 2) 중 “식품위생감시원은”을 “검체채취자는”으로 한다.

제6. 4. 4) (5) ➀ 중 “식품위생검사기관”을 “식품 등 시험·검사기관 또는 축산물 시험·검사기관”으로 한다.

제7. 4. 4.1 4.1.1 아. 중 “제9”를 “제6”으로 한다.

제7. 4. 4.1 4.1.2 가. 중 “확인시험에서 각종 생화학시험은”은 “확인시험은”으로 한다.

제7. 4. 4.3. 나.를 다음과 같이 한다.

나. 미생물 정성시험에서 5개 시료를 검사하는 경우, 5개 시료에서 25 g(mL)씩 채취하여 각각 검사한다. 다만, 시료에 직접 증균배지를 가하여 배양하는 경우는 5개 시료에서 25 g(mL)씩 채취하여 섞은(pooling) 125 g(mL)을 검사할 수 있다.

제7. 4. 4.3. 다.를 다음과 같이 한다.

다. 채취한 검체는 희석액을 이용하여 필요에 따라 10배, 100배, 1,000배 등 단계별 희석용액을 만들어 사용할 수 있다. 다만, 제조된 시험용액과 단계별 희석액은 즉시 실험에 사용하여야 한다.

제7. 4. 4.3. 마. 중 “화염멸균한 후 냉각하고 멸균한”을 “멸균한”으로 한다.

제7. 4. 4.4 4.4.1 63) 중 “조정한 후 50℃정도로”를 “조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃정도로”로 한다.

제7. 4. 4.4 4.4.1 97), 98), 99)를 다음과 같이 신설한다.

97) ITC 배지(Irgasan, Ticarcillin and potassium chlorate broth)

Enzymatic digest of casein                      10.0 g

Yeast extract	1.0 g

Magnesium chloride hexahydrate(MgCl2.6H2O)	60.0 g

Sodium Chloride	5.0 g

Malachite green, 0.2% aqueous solution	5.0 mL

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정하고, 988 mL를 취하여 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 후, 다음의 Supplement들을 가한다.

Supplement: Ticarcillin solution 1 mL(Ticarcillin 10 mg을 증류수 10 mL에  녹여 여과멸균한 것),  Irgasan solution 1 mL(Triclosan 10 mg을 95% Ethanol 10 mL에 녹인 것), Potassium chlorate solution 10 mL(Potassium chlorate 10 g을 증류수 100 mL에 녹여 여과 멸균한 것)

98) PEMBA한천배지(Polymyxin pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue Agar)

Enzymatic digest of casein	1.0 g

Mannitol	10.0 g

Sodium Chloride	2.0 g

Magnesium Sulfate	0.1 g

Disodium hydrogen phosphate                       2.5 g

Potassium dihydrogen phosphate                    0.25 g

Sodium Pyruvate	10.0 g

Bromothymol Blue	0.12 g

Agar	9∼18 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다. 50°C로 식힌 다음 Polymyxin B 용액 100,000 IU와 난황액(시액 8) 50 mL를 각각 넣어 혼합한다.

99) CCI 한천배지(Chomogenic Cronobacter Isolation agar)

Tryptic digest of casein	7.0 g

Yeast extract	3.0 g

Sodium chloride	5.0 g

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-α-D-glucopyranoside   0.15 g

Sodium desoxychloate	0.25 g

Ammonium iron(Ⅲ) citrate	1 g

Sodium thiosulfate	1 g

Agar	9∼18.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.3 ± 0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다.

제7. 4. 4.5 4.5.1 다. 중 “가공유류(유음료 제외)”를 “가공유(무지유고형분  5.5% 미만인 제품 제외)”로 한다.

제7. 4. 4.6 중 “통‧병조림, 레토르트 등 멸균제품에서”를 “장기보존식품 중 통‧병조림식품, 레토르트식품에서”로 한다.

제7. 4. 4.7 4.7.1 가. 3)을 다음과 같이 한다.

3) 완전시험

대장균군의 존재를 완전히 증명하기 위하여 위의 평판상의 집락이 그람음성, 무아포성의 간균임을 확인하고, 유당을 분해하여 가스의 발생 여부를 재확인한다. 확정시험의 Endo 한천배지(배지 5)나 EMB한천배지(배지 6)에서 전형적인 집락 1개 또는 비전형적인 집락 2개 이상을 보통한천배지(배지 8)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 동안 배양한다. 보통한천배지의 집락에 대하여 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정한다.

제7. 4. 4.7 4.7.2 가.의 내용 중 상단의 표를 다음과 같이 한다.

시험용액 접종량	0.1 mL	0.01 mL	0.001 mL	MPN
가스발생양성관수	5 개	2 개	1 개	70

제7. 4. 4.7 4.7.2 라. 중 “가공유류(유음료 제외)”를 “가공유(무지유고형분  5.5% 미만인 제품 제외)”로 “알가열성형제품”을 “알가열제품”으로 각각 한다.

제7. 4. 4.8 4.8.1 가.를 다음과 같이 한다.

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL를 3개의 EC 배지에 접종하고 44±1℃에서 24±2시간 배양 후 가스발생을 인정한 발효관은 추정시험 양성으로 하고 가스발생이 인정되지 않을 때에는 추정시험 음성으로 한다.

추정시험이 양성일 때에는 해당 EC 발효관으로부터 EMB 배지에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 집락을 보통한천배지에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 보통한천배지에서 배양된 집락을 취하여 그람염색을 실시하여 그람음성, 무아포성 간균을 확인한 후 생화학 시험을 실시하여 대장균 양성으로 판정한다.

제7. 4. 4.11 가. 1) 중 “42±0.5℃”를 “41.5±1℃”로 한다.

제7. 4. 4.11 가. 2) ∼ 4)의 내용 중 “축산물가공품”을 각각 “식품”으로 한다.

제7. 4. 4.17. 가.를 다음과 같이 한다.

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 PSBB 배지(배지 44) 225 mL을 가하고, 동시에 PSBB 배지를 가한 검액 10 mL를 취해 ITC 배지(배지 97) 90 mL에 가한다. 각각의 검액을 25℃에서 48시간 배양한다.

제7. 4. 4.18. 4.18.1 가.를 다음과 같이 한다.

가. 분리배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 희석액을 가하여 균질화한 검액을 MYP한천배지 한천배지(배지 46)에 접종하여 30℃, 24시간 배양하거나 PEMBA한천배지(배지 98)에 접종하여 37℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 MYP한천배지에서는 혼탁한 환을 갖는 분홍색 집락 또는 PEMBA한천배지에서는 혼탁한 환을 갖는 청녹색 집락을 선별한다. 이 때 명확하지 않을 경우 24시간 더 배양하여 관찰한다.

제7. 4. 4.18. 4.18.1 나. 중 “MYP 한천배지에서”를 “각 배지에서”로 한다.

제7. 4. 4.18. 4.18.2 가. 중 “0.2 mL씩 5장을 도말하여 총 접종액이 1 mL이 되게 한 후”를 “총 접종액이 1 mL이 되도록 3∼5장을 도말하여”로 한다.

제7. 4. 4.20 라.를 다음과 같이 한다.

라. 독소확인시험

1) 동물실험

가) 시험방법

시험용액을 4℃, 10,000 G로 20분간 원심분리하여 그 상층액을 pH 6.0으로 조정한 후, 동량의 2% trypsin용액을 가하여 35∼37℃에서 30～60분간 반응시킨 후, 이 용액 1 mL당 100U의 penicillin과 100 μg의 chloramphenicol을 첨가한다. 중량 15～20 g의 ICR계 마우스 5군(1군당 2～3수)을 준비하여 위의 검체액을 다음과 같은 5가지 방법으로 복강내 주사한다.

1군 : 시험용액 0.5 mL를 그대로 주사한다.

2군 : 시험용액을 100℃로 10분간 가열한 후 0.5 mL씩 주사한다.

3군 : 시험용액에 A형 항독소혈청(1～2 unit/mL)을 시험관 내에서 동량으로 혼합한 후 35∼37℃에서 15분간 반응시킨 후 0.5 mL씩 주사한다.

4군 : 3군과 같은 방법으로 B형 항독소혈청을 혼합하여 반응시킨 후, 0.5 mL씩 주사한다.

5군 : 3군과 같은 방법으로 E형 항독소혈청을 혼합하여 반응시킨 후, 0.5 mL씩 주사한다.

나) 판정

1～5군의 마우스를 1주간 관찰한 후 다음에 의해서 판정한다.

(1) 1군의 마우스가 사망하지 않았다면 음성으로 판정한다.

(2) 1군 마우스가 특정한 중독증상(복벽함몰, 사지마비, 호흡곤란)을 보이면서 사망하고 2군은 생존하였을 경우,

(가) 3～5군 중 한군이 생존하였다면 생존군에 사용한 항혈청유형의 독소를 양성으로 판정한다.

(나) 3～5군 모두 또는 각 군의 일부가 사망하였다면 시험용액을 희석하여 재시험하고 기타유형(C1, C2, D, F, G형)의 항독소혈청을 사용하여 중화시험을 실시한다.

2) PCR 반응을 통한 독소유전자 확인시험

가) 주형 유전자 준비

전형적인 집락을 취하여 멸균증류수 100 μL에 현탁한 후, 15분간 끓여 원심분리하고, 상층액 10 μL를 취하여 시료로 사용한다.

※ 상기의 방법과 동등 이상인 유전자 추출키트 및 장비를 사용할 수 있다.

나) PCR 프라이머 염기서열

toxin type	프라이머	염기서열(5‘→3’)	size (bp)
A	Foward	AGC TAC GGA GGC AGC TAT GTT	782
	Reverse	CGT ATT TGG AAA GCT GAA AAG G
B	Foward	CAG GAG AAG TGG AGC GAA AA	205
	Reverse	CTT GCG CCT TTG TTT TCT TG
E	Foward	CCA AGA TTT TCA TCC GCC TA	389
	Reverse	GCT ATT GAT CCA AAA CGG TGA
F	Foward	CGG CTT CAT TAG AGA ACG GA	543
	Reverse	TAA CTC CCC TAG CCC CGT AT

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
완충액	1 X	10 X	5 μL
dNTPs	0.2 mM	2.5 mM	4 μL
프라이머(F)	0.3 μM	10 pmol/μL	1.5 μL
프라이머(R)	0.3 μM	10 pmol/μL	1.5 μL
주형 DNA	-	-	1 μL
Taq	2 U/tube	5 U/μL	0.4 μL
총량	-	-	50 μL

다) PCR 반응액 조제

구분	온도	시간	반응회수
변성(denaturation)	95℃	30초	27회
결합(annealing)	60℃	25초
신장(extension)	72℃	1분25초
최종신장(final extension)	72℃	3분

라) PCR 반응조건

※ 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

마) 결과 확인
PCR 반응에서 각각의 보툴리눔 독소 타입별 증폭산물이 확인되는 경우 클로스트리디움 보툴리눔 독소유전자가 확인된 것으로 판정한다.

제7. 4. 4.21 나.를 다음과 같이 한다.

나. 분리배양

증균배양액을 CESA 한천배지(배지 60) 또는 E. sakazakii 한천배지(배지 62)에 도말하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양하거나 CCI 한천배지(배지 99)에 도말하여 41.5±1℃에서 24±2시간 배양한다. 배양후 CESA 한천배지에서 청록색, E. sakazakii 한천배지에서는 장파장의 자외선(366nm) 조사하에 형광을 나타내는 전형적인 집락, CCI 한천배지(배지 99)에서 청록색 집락 등 전형적인 집락들에 대하여 확인시험을 실시한다.

제7. 4. 4.25 다. 5) 나) (1) 중 “GI-F2”는 “GI-F2-U”로, “GII-RIM”은 “GII-RIM-U”로 한다.

제7. 4. 4.25 다. 5) 나) (2) 중 표 3.을 다음과 같이 한다.

표3. 노로바이러스 Semi-nested PCR 반응액 조성

Component	Volume	Genogroup
		GI primers	GII primers
dNTPs(10mM)	4 μL	-	-
10x Buffer(with MgCl2)	5 μL	-	-
D.W.	33 μL	-	-
Forward primer(20 pmol)	2.5 μL	GI-F2-U	GII-F3M
Reverse primer(20 pmol)	2.5 μL	GI-RIM	GII-RIM-U
Taq DNA polymerase(5 unit/μL)	1 μL	-	-
1st PCR Product	2 μL	-	-
Total	50 μL

제7. 4. 4.25 다. 5) 나) (4) 중 표 5.를 다음과 같이 한다.

표 5. 노로바이러스 PCR 프라이머 염기서열

Genogroup	Primer	Sequence(5'→3')	Application
I	GI-F1M	CTG CCC GAA TTY GTA AAT GAT GAT	One-step RT PCR
	GI-R1M	CCA ACC CAR CCA TTR TAC ATY TG	One-step RT PCR/ Semi-nested PCR/ Sequencing
	GI-F2-U	AAT ACG ACT CAC TAT AGA TGA TGA TGG CGT CTA AGG ACG C	Semi-nested PCR/ Sequencing
II	GII-F1M	GGG AGG GCG ATC GCA ATC T	One-step RT PCR
	GII-R1M	CCR CCI GCA TRI CCR TTR TAC AT	One-step RT PCR
	GII-F3M	TTG TGA ATG AAG ATG GCG TCG ART	Semi-nested PCR/ Sequencing
	GII-R1M-U	GCG GAT AAC AAT TTC ACA CAG GCC RCC IGC ATR ICC RTT RTA CAT	Semi-nested PCR/ Sequencing

제7. 4. 4.25 다. 5) 다) (1) 중 “313 bp”을 “330 bp”로, “310 bp”을 “332 bp”로, “689 bp”을 “706 bp”로, “686 bp”을 “708 bp”로 한다.

제7. 4. 4.25 다. 5) 라) (1) 중 “GI-F2”를 “GI-F2-U”로, “GII-RIM”를 “GII-RIM-U”로 한다.

제7. 4. 4.25 다. 5) 라) (3) 중 “데이터베이스와”를 “데이터베이스(GI, GII Reference sequence 및 NCBI blast)와”로 한다.

제7. 4. 4.26 중 나.를 다음과 같이 신설한다.

나. 크로노박터 시험법

1) 주형유전자 준비

증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후,  유전자 추출키트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.

프라이머/프로브	염기서열(5‘→3’)
Forward	5‘-GGG ATA TTG TCC CCT GAA ACA G-3’
Reverse	5‘-CGA GAA TAA GCC GCG CAT T-3’
Probe	5‘-FAM-AGA GTA GTA GTT GTA GAG GCC GTG CTT CCG AAA G-TAMRA-3’

2) Real-time PCR 프라이머 및 프로브 염기서열

3) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Universal Master Mix	1×	2×	12.5 μL
프라이머(F)	900nM	10 pmol/μL	2.25 μL
프라이머(R)	900nM	10 pmol/μL	2.25 μL
프로브(P)	250nM	10 pmol/μL	0.625 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
총량	-	-	25 μL

구분	온도	시간	반응회수
초기변성(Initial denaturation)	95℃	3분	-
변성(denaturation)	95℃	15초	40회
결합(annealing)	52℃	20초
신장(extension)	72℃	30초

4) Real-time PCR 반응조건

※ 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

5) 결과 확인

PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되는 경우 크로노박터가 검출된 것으로 판정한다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

제7. 6. 6.1 6.1.3 6.1.3.8 중 “제9.”를 “제7.”로 한다.

제7. 6. 6.1 6.1.3 6.1.3.9를 다음과 같이 한다.

6.1.3.9 대장균군

가. 제1법

위의 6.1.3.1에서 얻은 검체를 멸균증류수로 잘 씻고 멸균한 용기에 넣어 실온 또는 40℃ 이하의 온탕에서 섞으면서 전부 녹인 후 즉시 4.7.2 정량시험 가. 최확수법 1) 유당배지법에 따라 시험한다. 다만, 별표 1 또는 별표 2의 최확수표(/100 mL)로부터 구한 값의 1/2을 검체 50 mL 중의 대장균군수로 한다.

나. 제2법

위의 6.1.3.1에서 얻은 검체를 멸균증류수로 잘 씻고 멸균한 용기에 넣어 실온 또는 40℃ 이하의 온탕에서 섞으면서 전부 녹인 후 즉시 막여과법에 의하여 시료 50 mL를 여과한 후 여과지를 데스옥시콜레이트 유당한천배지위에 올려놓고 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 이하의 조작은 4.7.2 정량시험 나. 데스옥시콜레이트유당한천배지법에 따라 한다.

제7. 6. 6.6.2.2 중 라.를 다음과 같이 신설한다.

라. 식염

제7. 일반시험법 2. 식품성분시험법 2.2 미량영양성분시험법 2.2.1 무기질 2.2.1.5 식염에 따라 시험한다.

제7. 6. 6.6.4.1 총염소 시험법과 6.6.4.3 황산이온 시험법 중 “불용분에서의 시료용액”을 “시료 10 g을 정밀히 달아 비커에 넣고 약 200 mL의 물에 용해시켜 미리 100～110℃에서 건조하여 항량한 유리여과기에 거르고 이 액에서 염소이온이 나오지 않을 때까지 물로 충분히 씻는다. 이 여액을 메스플라스크(250 mL)에 옮겨 눈금까지 희석한 시료용액”으로 한다.

제7. 6. 6.6.4.4 사분을 삭제하고 기존 6.6.4.5를 6.6.4.4로 한다.

제7. 6. 6.8.3.1의 가를 다음과 같이 한다.

가. 분석원리

검체 중 α-아밀라아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 전분으로부터 포도당 1 μg을 분해해내는데 필요한 α-아밀라아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 포도당의 양을 검체 1 g이 함유하는 α-아밀라아제의 역가(Unit/g)로 환산한다.

제7. 6. 6.8.3.2의 가와 사를 각각 다음과 같이 한다.

가. 분석원리

검체 중 프로테아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 카제인으로부터 L-티로신 1 μg을 분해해 내는데 필요한 프로테아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 L-티로신의 양을 검체 1 g이 함유하는 프로테아제의 역가(Unit/g)로 환산한다.

사. 효소의 역가 계산

검량선을 통해 산출된 시험용액 중 L-티로신의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 프로테아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

역가(Unit/g) =	시험용액 중 L-티로신 양(μg/mL) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 4(4 mL 중 1 mL 발색 반응) ✕ 시험용액의 희석배수
	10(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

제7. 6. 6.10 6.10.2를 다음과 같이 한다.

6.10.2 가공유류

위의 6.10.1 우유류의 시험방법에 따라 시험한다. 다만, 가공유의 무지유고형분은 6.10.6 농축유류의 마. 당분에 따라 시험하여 얻은 양을 감하여 무지유고형분으로 한다.

제7. 6. 6.10 6.10.6 중 마.를 다음과 같이 한다.

마. 당분

제7. 일반시험법 2. 식품성분시험법 2.1 일반성분시험법 2.1.4 탄수화물 2.1.4.1 당류 2.1.4.1.4 기기분석법에 의한 당류의 정량에 따라 설탕, 포도당, 과당을 시험한다.

제7. 9. 중 9.1.5를 다음과 같이 한다.

9.1.5 무기비소(Inorganic arsenic)

가. 시험법의 적용범위

무기비소의 기준규격이 설정된 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 무기비소를 1% 질산용액으로 추출하여 액체크로마토그래프로 비소 종을 분리한 후 유도결합플라즈마/질량분석기로 분석한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-유도결합플라즈마/질량분석기(LC-ICP/MS)

※ 액체크로마토그래프와 유도결합플라즈마/질량분석기 연결 시 튜브 길이를 40 cm 이내로 한다.

라. 시약 및 시액

1) 표준원액 : 아비산나트륨(As(Ⅲ), Sodium arsenite, NaAsO2) 및 비산나트륨(As(Ⅴ), Sodium arsenate dibasic heptahydrate, Na2HAsO4․7H2,O) 표준품을 증류수에 녹여 각각 As로써 농도가 1,000 mg/L이 되게 한다.

2) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 0.2% 질산용액으로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 혼합표준용액은 분석 당일 조제하여 사용한다.

마. 시험용액의 조제

균질화한 시료 1 g(해조류 건조물의 경우 0.2 g∼1 g)을 정밀히 달아 용기(단, 유리용기는 제외)에 넣고 1% 질산용액 5 mL를 가하여 90℃에서 90분간 열탕 추출한다. 이때 초기 30분 동안 시료와 1% 질산용액이 충분히 섞이도록 5분∼10분 간격으로 격렬히 흔들어준다. 추출 후 여기에 물을 넣어 25 mL되게 한 후 잘 혼합하고 10분간 원심분리(3,000 G)한다. 원심분리 후 상층액을 적당히 취하여 다시 10분간 원심분리(3,000 G)하고 그 상층액을 멤브레인 필터(nylon, 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 컬럼 : C18 MG (4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.05%(v/v) 메탄올, 10 mM sodium 1-butane sulfonate, 4 mM malonic acid, 4 mM tetramethyl ammonium hydroxide(TMAH)의 혼합용액을 조제하고, 이때 용액의 pH는 10% 질산용액을 사용하여(약 1.8 mL/L) 정확히 2.7로 맞춘다.

다) 컬럼온도 : 25℃

라) 유속 : 0.75 mL/min

마) 주입량 : 10～50 μL

2) 유도결합플라즈마/질량분석기 측정조건(예)

가) RF Power : 1300～1500W

나) Nebulizer argon gas : 0.95～1.15 L/min

다) Auxillary argon gas flow : 1.2～1.5 L/min

라) Plasma argon gas flow: 15～20 L/min

마) Lens voltage : 5～10 V

바) Ion monitored : As (m/z 75), 다만, DRC mode 사용시에는 AsO (m/z 91)로 분석한다.

3) 검량선의 작성

혼합표준용액을 농도별(1～50 ppb)로 취하여 분석한 후 크로마토그램상의 As(Ⅴ)와 As(Ⅲ) 각 피크 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 혼합표준용액의 크로마토그램(예)

그림 1. 혼합표준용액(각 10 ppb)의 크로마토그램

사. 정성시험

위의 시험조작조건에서 얻은 시험용액의 크로마토그램으로부터 목적원소의 질량값(m/z 75)의 피크들은 혼합표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻은 시험용액의 피크가 혼합표준용액 피크와 일치할 때 피크면적을 검량선에 대입하여 As(Ⅲ)와 As(Ⅴ)를 정량하고 각각의 정량값을 합하여 무기비소의 함량으로 한다.

제7. 9. 중 9.2.9를 다음과 같이 신설한다.

9.2.9 아플라톡신(B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A, 제랄레논, 푸모니신(B1, B2) 동시분석법

가. 시험법 적용범위

식물성 원료 및 그 가공식품

나. 분석원리

검체 중 곰팡이독소를 0.1% 개미산을 함유한 50% 아세토니트릴용액으로 추출한 후 정제 카트리지를 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

2) 정제용 카트리지 : 곰팡이독소 다성분 분석용 SPE

3) 유리섬유여과지 : GF/A(pore size : 1.6 ㎛)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 추출용액 : 0.1% 개미산을 함유한 50% 아세토니트릴 용액

4) 표준원액 : 아플라톡신 B1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G1, 아플라톡신 G2, 푸모니신 B1, 푸모니신 B2의 표준품 각각은 메탄올로 오크라톡신 A, 제랄레논의 표준품 각각은 아세토니트릴에 용해하여 1,000 μg/mL가 되게 한다.

5) 혼합표준용액 : 각각의 표준원액을 0.1% 개미산을 함유한 50% 메탄올 용액을 사용하여 아플라톡신 B1은 0.05 μg/mL, 아플라톡신 B2는 0.125 μg/mL, 아플라톡신 G1, G2는 0.5 μg/mL, 오크라톡신 A는 0.25 μg/mL, 제랄레논은 1 μg/mL, 푸모니신 B1은 5 μg/mL, 푸모니신 B2는 10 μg/mL로 조제한 후 실험 시 적당한 농도로 희석하여 검량선을 작성한다.

6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 2∼5 g을 정밀히 달아 추출용액(V1) 20 mL(액상시료의 경우 최종 20 mL가 되도록 함)를 가하고, 30분간 추출한 후 3,700 G에서 10분간 원심분리한다. 원심분리한 액을 유리섬유여과지로 여과한 후 여액(V2) 3 mL에 물을 가해 15 mL(V3)가 되게하여 추출액으로 한다.

2) 정제

초당 1방울의 속도로 정제 카트리지를 아세토니트릴 2 mL, 물 2 mL로 활성화시킨 후 추출액(V4) 5 mL를 주입하여 통과시킨다. 이어서 물 2 mL, 10% 아세토니트릴 용액 2 mL를 같은 유속으로 통과시킨 후 정제 카트리지 내에 남아 있는 용액을 완전히 제거한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액 2 mL, 메탄올 4 mL로 용출시킨 후 50℃에서 질소로 건고시킨다. 건고물에 0.1% 개미산을 함유한 50% 메탄올 용액 0.5∼1 mL(V5)를 가하여 용해시킨 후 필터(PTFE, 0.2 ㎛)로 여과한 액을 최종 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼 : C18(3 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 5 mM 개미산암모늄 용액(0.1% 개미산 포함)

(2) 이동상 B : 5 mM 개미산암모늄 메탄올 용액(0.1% 개미산 포함)

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.5	95	5
2	60	40
9	0	100
11.5	0	100
12	95	5
15	95	5

라) 유속 : 0.5 mL/min

마) 주입량 : 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) Ionization : ESI Positive, Negative mode

나) Curtain gas : 30

다) Collision gas : 9

라) Ion spray voltage : 4,500

마) Ion source temperature : 500℃

바) Ion source gas 1 : 50

사) Ion source gas 2 : 50

아) Collision gas : N2

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, V)
아플라톡신 B1	Positve	312.27	312.97	285.1	35
				240.9	51
아플라톡신 B2	Positve	314.29	314.97	287.0	37
				258.8	41
아플라톡신 G1	Positve	328.27	328.96	199.9	45
				243.1	55
아플라톡신 G2	Positve	330.29	331.10	189.1	57
				245.1	57
오크라톡신 A	Positve	403.81	403.97	238.9	35
				102.0	95
푸모니신 B1	Positve	721.83	722.27	334.1	55
				352.2	51
푸모니신 B2	Positve	705.83	706.25	336.2	46
				318.2	46
제랄레논	Negative	318.36	317.02	174.9	-34
				131.0	-38

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 액체크로마토그래프 분석조건 및 각 생성이온에 대한 질량분석기의 분석조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 표준용액 크로마토그램

Ⓐ: 아플라톡신 B1  312.97/285.1

Ⓑ: 아플라톡신 B2  314.97/287.0

Ⓒ: 아플라톡신 G1  328.96/199.9

Ⓓ: 아플라톡신 G2  331.10/189.1

Ⓔ: 오크라톡신 A  403.97/238.9

Ⓕ: 푸모니신 B1  722.27/334.1

Ⓖ: 푸모니신 B2  706.25/336.2

Ⓗ: 제랄레논  317.02/174.9

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기의 표준용액 크로마토그램

Ⓐ: 아플라톡신 B1, Ⓑ: 아플라톡신 B2, Ⓒ: 아플라톡신 G1, Ⓓ: 아플라톡신 G2, Ⓔ: 오크라톡신 A, Ⓕ: 푸모니신 B1, Ⓖ: 푸모니신 B2, Ⓗ: 제랄레논

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 피크 머무름 시간과 특성이온으로 시험용액의 곰팡이독소를 확인한다.

아. 정량시험

시험용액 크로마토그램상의 피크 머무름 시간과 특성이온이 표준용액과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

곰팡이독소의 함량(μg/kg)	=	C	x	V1	x	V3	x	V5
				S		V2		V4

1) 계산

C  : 검량선에서 구한 곰팡이독소의 함량(ng/mL)

S  : 시료량(g)

V1 : 추출용액의 부피(mL)

V2 : 추출용액에서 취한 여액의 부피(mL)

V3 : 최종 추출액의 부피(mL)

V4 : 추출액의 주입량(mL)

V5 : 건고물 용해용액의 부피(mL)

제7. 10. 10.1 10.1.5 다. 2) 중 표 2.를 다음과 같이 한다.

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	SSllb 1-5'	5'-CTC CCA ATC CTT TGA CAT CTG C-3'
		SSllb 1-3'	5'-TCG ATT TCT CTC TTG GTG ACA GG-3'
		SSllb-Taq	5'-FAM-AGC AAA GTC AGA GCG CTG CAA TGC A-TAMRA-3'
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	SSllb 3-5'	5'-CCA ATC CTT TGA CAT CTG CTC C-3'
		SSllb 3-3'	5'-GAT CAG CTT TGG GTC CGG A-3'
		SSllb-Taq	5'-FAM-AGC AAA GTC AGA GCG CTG CAA TGC A -TAMRA-3'
	옥수수 adh1 (135 bp)	Zm adh1-F	5'-CGT CGT TTC CCA TCT CTT CCT CC-3'
		Zm adh1-R	5'-CCA CTC CGA GAC CCT CAG TC-3'
		Zm adh1-P	5'-FAM-AAT CAG GGC TCA TTT TCT CGC TCC TCA-TAMRA-3'
	옥수수 hmg (79 bp)	MaiJ-F2	5'-TTG GAC TAG AAA TCT CGT GCT GA-3'
		Mhmg-rev	5'-GCT ACA TAG GGA GCC TTG TCC T-3'
		Mhmg-probe	5'-FAM-CAA TCC ACA CAA ACG CAC GCG TA-TAMRA-3'
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	P35S 1-5'	5'-ATT GAT GTG ATA TCT CCA CTG ACG T-3'
		P35S 1-3'	5'-CCT CTC CAA ATG AAA TGA ACT TCC T-3'
		P35S-Taq	5'-FAM-CCC ACT ATC CTT CGC AAG ACC CTT CCT-TAMRA-3'
	NOS (151 bp)	NOS ter 2-5'	5'-GTC TTG CGA TGA TTA TCA TAT AAT TTC TG-3'
		NOS ter 2-3'	5'-CGC TAT ATT TTG TTT TCT ATC GCG T-3'
		NOS-Taq	5'-FAM-AGA TGG GTT TTT ATG ATT AGA GTC CCG CAA-TAMRA-3'
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	Bt176 2-5'	5'-TGT TCA CCA GCA GCA ACC AG-3'
		Bt176 2-3'	5'-ACT CCA CTT TGT GCA GAA CAG ATC T-3'
		Bt176-Taq	5'-FAM-CCG ACG TGA CCG ACT ACC ACA TCG A-TAMRA-3'
	Bt11 (127 bp)	Bt11 3-5'	5'-AAA AGA CCA CAA CAA GCC GC-3'
		Bt11 3-3'	5'-CAA TGC GTT CTC CAC CAA GTA CT-3'
		Bt11-Taq	5'-FAM-CGA CCA TGG ACA ACA ACC CAA ACA TCA-TAMRA-3'
	GA21 (133 bp)	GA21 3-5'	5'-GAA GCC TCG GCA ACG TCA-3'
		GA21 3-3'	5'-ATC CGG TTG GAA AGC GAC TT-3'
		GA21-Taq	5'-FAM-AAG GAT CCG GTG CAT GGC CG-TAMRA-3'
	T25 (149 bp)	T25 1-5'	5'-GCC AGT TAG GCC AGT TAC CCA-3'
		T25 1-3'	5'-TGA GCG AAA CCC TAT AAG AAC CCT-3'
		T25-Taq	5'-FAM-TGC AGG CAT GCC CGC TGA AAT C-TAMRA-3'
	MON810 (113 bp)	M810 2-5'	5'-GAT GCC TTC TCC CTA GTG TTG A-3'
		M810 2-3'	5'-GGA TGC ACT CGT TGA TGT TTG-3'
		M810-Taq	5'-FAM-AGA TAC CAA GCG GCC ATG GAC AAC AA-TAMRA-3'
	NK603 (143 bp)	NK603 01-5'	5'-TAT CTT GCT CGA TGC CTT CTC C-3'
		NK603 01-3'	5'-ACA CCA TTG CAG ATT CTG CTA ACT-3'
	NK603 (108 bp)	NK603 primer F	5'-ATG AAT GAC CTC GAG TAA GCT TGT TAA-3'
		NK603 primer R	5'-AAG AGA TAA CAG GAT CCA CTC AAA CAC T-3'
		NK603 probe PR	5'-FAM-TGG TAC CAC GCG ACA CAC TTC CAC TC-TAMRA-3'
	TC1507 (103 bp)	TC1507 01-5'	5'-GCT TCA ACA GGG CTG AGT TTG-3'
		TC1507 01-3'	5'-CCC CAC ACA GTT TGG GAT CTA-3'
	TC1507 (58 bp)	MaiJ-F2	5'-TAG TCT TCG GCC AGA ATG G-3'
		MaiY-R3	5'-CTT TGC CAA GAT CAA GCG-3'
		MaiY-S1	5'-FAM-TAA CTC AAG GCC CTC ACT CCG-TAMRA-3'
	MON863 (152 bp)	tahsp17-5‘	5'-GTG TTT TTT GGA TCC CCG G-3'
		MON 3-3‘	5'-CCA TCA TGG TTG GTT GGA CTT-3'
	MON863 (84 bp)	MON863 primer F	5'-GTA GGA TCG GAA AGC TTG GTA C-3'
		MON863 primer R	5'-TGT TAC GGC CTA AAT GCT GAA CT-3'
		MON863 probe	5'-FAM–TGA ACA CCC ATC CGA ACA AGT AGG GTC A-TAMRA-3'
	DAS59122-7 (141 bp)	DAS 5-5‘	5'-GCA CCT GTG ATT GGC TCA TAA A-3'
		Pubi-3‘	5'-CTC CCT TAA TTC TCC GCT CAT G-3'
	DAS59122-7 (84 bp)	DAS-59122-7 rb1f	5'-GGG ATA AGC AAG TAA AAG CGC TC-3'
		DAS-59122-7 rb1r	5'-CCT TAA TTC TCC GCT CAT GAT CAG-3'
		DAS-59122-7 rb1s	5'-FAM-TTT AAA CTG AAG GCG GGA AAC GAC AA-TAMRA-3'
	MON88017 (100 bp)	MON88017-G-5'	5'-GCT AGC TTG ATG GGG ATC AGA TTG-3'
		MON88017-G-3‘	5'-GAT TGG TTT GTT TTC GGC AGT ATG-3'
	MON88017 (95 bp)	MON88017AF	5'-GAG CAG GAC CTG CAG AAG CT-3`
		MON88017AR	5`-TCC GGA GTT GAC CAT CCA-3`
		MON88071AP	5`-FAM-TCC CGC CTT CAG TTT AAA CAG AGT CGG GT-TAMRA-3`
	MIR604 (142 bp)	MIR604-CJB264-5'	5'-TCG CGC GCG GTG TCA TCT ATG-3'
		MIR604es-LB-R-3'	5'-CGC GAC ACA CCT CGT TAG TTA A-3'
	MIR604 (76 bp)	MIR604 primer F	5'-GCG CAC GCA ATT CAA CAG-3'
		MIR604 primer R	5'-GGT CAT AAC GTG ACT CCC TTA ATT CT-3'
		MIR604 probe	5'-FAM-AGG CGG GAA ACG ACA ATC TGA TCA TG-TAMRA-3'
	MON89034 (112 bp)	MON89034-5'	5'-CTC CAT ATT GAC CAT CAT ACT C-3'
		MON89034-3'	5'-GGG TTG AAA TGA AAT TTC CAA TAC-3'
		MON89034-Taq	5'-FAM-ATC CCC GGA AAT TAT GTT-MGBNFQ-3'
	MIR162 (149 bp)	FE02402-5'	5'-GTG GAC TGA AAG GAG ACT TTG TTT ATC-3'
		FE01004-3'	5'-GAT TGT CGT TTC CCG CCT TCA GTT-3'
	MIR162 (92 bp)	MIR162-f1	5'-GCG CGG TGT CAT CTA TGT TAC TAG-3'
		MIR162-r1	5'-TGC CTT ATC TGT TGC CTT CAG A-3'
		MIR162-p1	5'-FAM-TCT AGA CAA TTC AGT ACA TTA AAA ACG TCC GCC A-TAMRA-3'
	DP098140-6 (147 bp)	DP098140-6-5'	5'-TCT CTT TGC TTG GTC TTT CTC TAT CGA-3'
		DP098140-6-3'	5'-CCA AAC GTA AAA CGG CTT GTC C-3'
	DP098140-6 (80 bp)	DP098-f6	5'-GTG TGT ATG TCT CTT TGC TTG GTC TT-3'
		DP098-r2	5'-GAT TGT CGT TTC CCG CCT TC-3'
		DP098-p5	5'-FAM-CTC TAT CGA TCC CCC TCT TTG ATA GTT TAA ACT-TAMRA-3'
	3272 (141 bp)	FE02401-5'	5'-CGA TCG AAT TCA TCA GAC CAG ATT C-3'
		FE01002-3'	5'-CGT GAC TCC CTT AAT TCT CCG CT-3'
	3272 (95 bp)	Event 3272-F	5'-TCA TCA GAC CAG ATT CTC TTT TAT GG-3'
		Event 3272-R	5'-CGT TTC CCG CCT TCA GTT TA-3'
		Event 3272-P	5'-FAM-ACT GCT GAC GCG GCC AAA CAC TG-TAMRA-3'
	MON87460 (85 bp)	MON87460-5'	5'-AGC GTT AGA CGG CTG TCT TTG AG-3'
		MON87460-3'	5'-GAT GGG GGG CGT TTC TTT GGA AG-3'
	MON87460 (82 bp)	MON87460 1Q	5'-CAC GTT GAA GGA AAA TGG ATT G-3'
		MON87460 2Q	5'-TCG CGA TCC TCC TCA AAG AC-3'
		MON87460-Taq	5'-FAM-AGG GAG TAT GTA GAT AAA TTT TCA AAG CGT TAG ACG GC-TAMRA-3'
	5307 (149 bp)	FE06138	5'-CGC GCG GTG TCA TCT ATG T-3'
		MIC5307es-R21	5'-GGC CCA GGG AAG AGG GTA TAT-3'
	5307 (107 bp)	5307 i3' forward primer	5'-CAT GGC CGT ATC CGC AAT GTG-3'
		5307 i3' reverse primer	5'-TGC ACC CTT TGC CAG TGG-3'
		5307 i3' S2 probe	5'-FAM-ACC ACA ATA TAC CCT CTT CCC TGG GCC AG-TAMRA-3'
	MON87427 (152 bp)	87427-1GB	5'-GCG CGC AAA CTA GGA TAA ATT ATC G-3'
		87427-2GB	5'-CTG CCG CGT TGC AAC TTG CAT GT-3'
	MON87427 (95 bp)	MON87427 primer1	5'-ACG GAA ACG GTC GGG TCA AAT G-3'
		MON87427 primer2	5'-CCA TGT AGA TTT CCC GGT TTT CTC-3'
		MON87427 probe	5'-FAM-TCG GGA CAA TAT GGA GAA AAA GAA AGA G-TAMRA-3'
	DAS40278-9 (144 bp)	DAS40278-9-5'	5'-CCT CTC TAA GCG GCC CAA ACT-3'
		DAS40278-9-3'	5'-ATT CTG GCT TTG CTG TAA ATC GT-3'
	DAS40278-9 (98 bp)	DAS40278-9_5’-f1	5'-CAC GAA CCA TTG AGT TAC AAT C-3'
		DAS40278-9_5’-r3	5'-TGG TTC ATT GTA TTC TGG CTT TG-3'
		DAS40278-9_5’-S1	5'-FAM-AGC TAA CCT TCA TTG TAT TCC G-TAMRA-3'
	DP004114-3 (118 bp)	DP4114-3-F	5'-TTA AAA ACG TCC GCA ATG TG-3'
		DP4114-3-R	5'-CCG CGC TGT TTT CTA GTT TT-3'
	DP004114-3 (90 bp)	08-O-2677	5'-CGT TTG TAG CAC TTG CAC GTA GT-3'
		08-O-2678	5'-GGT AAC CGC TCT TCC AGT TGA A-3'
		08-QP74	5'-FAM-AAG CTT CAA CAC AGA TC-MGB-3'
	MON87411 (112 bp)	87411 primer G1	5'-TAG AGC GGC CGC GTT TAA ACT ATC-3'
		87411 primer G2	5'-ACC AGT TCA ATA GAA AAG TAT GCA CAC-3'
	MON87411 (109 bp)	87411 QF	5'-CTC TGT AAC AGA AAA CAC CAT CTA GAG-3'
		87411 QR	5'-ACA AAA GTG AAC TAG TTC TAG GGT AGA T-3'
		87411 QP	5'-FAM-CCG CGT TTA AAC TAT CAG TGT TTA GAG AAT-TAMRA-3'
	MON 87419 (184 bp)	87419-184G1	5'-GGT CGC TGC CAG GTA TTG ATG TG-3'
		87419-184G2	5'-GAT TCG CTA CCT TAG GAC CGT TAT AG-3'
	MON87419 (97bp)	87419 QF	5'-CGG TCG CTG CCA GGT ATT G-3'
		87419 QR	5'-CAG ACC TCA ATT GCG AGC TTT CT-3'
		87419 QP	5'-FAM-TGT GCG CCA GTC AGC ATC ATC ACA CC-TAMRA-3'
	MON 87403 (175 bp)	87403-175G1	5'-CGC TGC GGA CAT CTA CAT TTT TG-3'
		87403-175G2	5'-GCT CAA GTG ATA AAT AGG TGG CAA CA-3'
	MON87403 (88bp)	87403 QF	5'-CTT TCT TTT TCT CCA TAT TGA CCA TCA TAC-3'
		87403 QR	5'-TAC TCC GGA ATG AGT GCT CTG TAT C-3'
		87403 QP	5'-FAM-TCA TTG CGA TCC ACA TTT CCC TAC ATG G-TAMRA-3'
	MZHG0JG (154 bp)	FE08186-MZHG-F	5'-ATT AGC TAA CGG CCA GGA TCG-3’
		FE30056-MZHG-R	5'-CAC CGT GAC ATG CTT AGC AAA A-3’
	MZHG0JG (81 bp)	MZHG0JG forward	5'-CAA CTA GCT AGA TTA ATT AAC GCA ATC TG-3’
		MZHG0JG reverse	5'-ATT TGT TTG CAA GGT GTG GGA-3’
		MZHG0JG probe	FAM-TTA AGT TGT CTA AGC GTC AAT TTG-BHQ-1

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

제7. 10. 10.1 10.1.5 라. 중 ①∼④를 각각 다음과 같이 한다.

① 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인된 경우 : RRS,　MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, SYHTOH2,  DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, Bt11, GA21, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, DP098140-6, 3272, MON87460, 5307, MON87427, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419, MON87403, MZHG0JG(이상 옥수수)

② 35S 프로모터 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP098140-6, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419, MON87403(이상 옥수수)

③ NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), GA21, MIR604, MIR162, DP098140-6, 3272, 5307, DAS-40278-9, MON87419, MON87403(이상 옥수수)

④ 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인되지 않은 경우 : MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS-81419-2, MON87751(이상 콩), DP098140-6, DAS-40278-9, MON87419, MON87403(이상 옥수수)

제7. 10. 10.1 10.1.5 바. 3)을 다음과 같이 한다.

3) 유전자변형 이벤트 중 35S 프로모터 및 NOS 종결인자(terminator)를 모두 사용하는 것으로는 RRS, SYHTOH2, Bt11, NK603, MON863, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427, MZHG0JG가 있고,  35S 프로모터만 사용하는 것으로는 A2704-12, A5547-127, Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP004114-3, MON87411이 있으며, NOS 종결인자(terminator)만 사용하는 것으로는 FG72, GA21, MIR604, MIR162, 3272, 5307이 있다.

제7. 10. 10.2를 다음과 같이 한다.

10.2 식품 조사처리 확인시험

10.2.1 유전자코메트 분석법(스크리닝검사법)

가. 시험법 적용범위

냉동 및 냉장 식육(우육, 돈육, 계육)에 적용한다.

나. 분석원리

이온화 조사처리는 세포의 유전자에 손상을 일으키며 이러한 유전자의 손상된 정도를 단일세포의 마이크로젤 전기영동법을 이용하여 코메트 세포를 측정함으로써 조사처리 여부를 검지하는 방법이다.

다. 장치 및 기구

1) 형광항체현미경(FITC Filter 494 nm)

2) 전기영동장치

3) 코메트슬라이드

라. 시약 및 시액

1) 20 mM EDTA-PBS

2) Trypan blue stain

3) Low Melting Point Agarose

4) Lysis Solution : 2.5 M NaCl, 100 mM EDTA, 10 mM Tris base, 1% sodium lauryl sarcosinate, 0.01% TritonX-100, 10% Dimethyl Sulfoxide

5) TBE Buffer : 90 mM Tris-borate, 3 mM EDTA, pH 8.5

6) TE Buffer : 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5

7) SYBR Green 형광염색액

마. 검체조제

1) 시료의 표층부분을 제거한 후, 예리한 메스날 등을 사용하여 육중심부의 근육조직을 얇게 잘라내어 약 1 g 정도 채취하고 이를 교차하면서 잘게 세절 하여 다진 다음 냉장된 20 mM EDTA-PBS에 1:10의 비율(w/v)로 부드럽게 혼합한다.

2) 이를 200 ㎛ 및 100 ㎛ 나일론 여과포로 2회 여과한 다음 trypan blue stain(0.4%)용액 으로 염색하여 살아 있는 세포수를 계산하고 냉장 PBS로 약 105 cell/mL이 되도록  세포수를 조정한다.

바. 시험조작

1) 세포 부유액을 42℃로 유지된 0.5% Low Melting Point Agarose와 약 1:10(v/v) 비율로 혼합한 즉시 약 50 μL를 채취하여 신속하게 코메트슬라이드에 고르게 펴고 약 5℃ 냉암소에서 10분간 경화한다.

2) 이를 약 5℃ 냉암소에서 세포용해액(Lysis Solution)에 완전히 침지된 상태로 약 28분 동안 반응시킨다.

3) 코메트슬라이드와 경화된 agar 주변의 세포용해액을 흡수지로 신속하게 제거한 후, TBE Buffer(pH 8.5)에 완전히 침지하여 약 5분 동안 2회 반복하여 완충시킨다.

4) 즉시 코메트슬라이드를 TBE Buffer(pH 8.5)로 채워진 전기영동조에 넣어 완전히 침지시킨 상태에서 전압 1 V/㎝(예: 27㎝ 길이의 전기영동조의 경우 전압은 약 27V, 전류는 약 28 mA) 조건으로 19분 동안 전기영동 시킨다.

5) 전기영동 후 즉시 코메트슬라이드 위에 미리 준비한 형광염색용액 두 세 방울을 떨어뜨려 형광염색한다. 형광염색용액은 SYBR Green을 DMSO로 약 10배 희석하여 냉동(-20℃ 이하)보관하고 이를 사용 할 때에 TE Buffer로 희석 (1:1,000, v/v)하여 사용한다.

사. 판정

1) 형광항체현미경(FITC Filter 494 nm) 100배에서 200배 확대 비율로 전체적인 코메트세포의 형태를 관찰하여 조사처리 여부를 일차적으로 판단한다(그림 1.).

가) 코메트세포(comet cell)의 형태가 원형 또는 난원형을 띠면서 comet tail 현상이 전체적으로 일정하게 나타나는 경우 조사처리된 것으로 판단한다.

나) 코메트세포(comet cell)의 형태가 원형 또는 난원형을 띠면서 코메트꼬리 (comet tail) 현상이 거의 나타나지 않는 경우 조사처리 되지 않은 것으로 판단한다.

그림 1. 비조사 육류(좌)와 조사된 육류(우)의 코메트세포(형광항체현미경 200배)

2) 1)의 가)과 같이 조사처리된 것으로 판단된 시료에 대해서는, 형광항체 현미경 200배에서 눈금자(1 ㎝ 길이, 눈금단위 10 ㎛)가 있는 대안렌즈를 사용하여 코메트슬라이드의 중앙부분에 위치한 comet cell(시료 하나에 75개 이상)의 Comet head 직경과 Comet tail(comet head 중간 부분에서 comet tail 끝 부분까지의 길이)의 길이를 신속하게 측정한 다음, comet tail의 길이에 대한 comet head 직경의 비율을 계산하여 다음의 기준에 따라 조사처리 여부를 판정한다(표 1.).

가) 1)의 가)에 해당되고 comet head의 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 1 kGy 조사 시료의 평균치 이상인 경우에는 양성으로 판정하고, 전자스핀공명법이나 기체크로마토그래프/질량분석법을 적용하여 조사처리 여부를 최종 판정한다.

나) 1)의 나)에 해당되고 comet head의 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 비 조사 시료의 평균치 이내인 경우(음성), 조사처리 되지 않은 것으로 판정한다.

다) 부분적인 comet tail 현상이 나타나고 comet head 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 비조사처리 시료의 평균치 이상에서 1 kGy 조사된 시료의 평균치 이하의 범위에 해당되는 경우 의양성으로 판정하고, 재 실험을 실시하여 다시 의양성으로 판정되는 경우에는 조사처리 되지 않은 것으로 판정한다.

표 1. 조사처리 육류의 코메트 세포 측정 및 흡수선량 평가 결과

선량(kGy)		코메트세포 (μm)					코메트꼬리/ 코메트머리	선량평가(%)	검지정확도(%)
		코메트머리 (직경)	코메트꼬리 (길이)		전체 길이			정확히 평가된 시료 수 / 시료 수(%)	정확히 검지된 시료 수 / 시료 수(%)
0	FC1	3.91 ± 0.91		2.63 ± 0.52		4.58 ± 0.73	0.71 ± 0.20	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CC2	3.94 ± 0.88		2.55 ± 0.51		4.52 ± 0.74	0.67 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP3	4.0 ± 0.88		2.62 ± 0.52		4.62 ± 0.73	0.68 ± 0.19	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP4	4.07 ± 0.90		2.57 ± 0.53		4.60 ± 0.18	0.66 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP5	4.04 ± 0.87		2.67 ± 0.57		4.69 ± 0.78	0.69 ± 0.19	9 / 10 ( 90.0)	9 / 10 (90.0)
	FB6	4.07 ± 0.88		2.63 ± 0.54		4.66 ± 0.76	0.67 ± 0.19	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB7	3.96 ± 0.89		2.56 ± 0.52		4.54 ± 0.76	0.67 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB8	4.01 ± 0.88		2.61 ± 0.52		4.62 ± 0.74	0.68 ± 0.18	9 / 10 ( 90.0)	9 / 10 ( 90.0)
1	FC	3.35 ± 0.72		4.88 ± 1.60		6.54 ± 1.77	1.47 ± 0.42	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	3.29 ± 0.39		4.73 ± 1.12		6.36 ± 1.21	1.45 ± 0.32	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	3.37 ± 0.72		4.94 ± 1.64		6.62 ± 1.81	1.49 ± 0.44	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	3.31 ± 0.38		4.76 ± 1.12		6.39 ± 1.21	1.45 ± 0.31	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	3.39 ± 0.71		4.50 ± 1.62		6.66 ± 1.79	1.49 ± 0.44	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	3.42 ± 0.68		4.97 ± 1.74		6.67 ± 1.87	1.47 ± 0.48	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.26 ± 0.37		4.72 ± 1.05		6.33 ± 1.14	1.45 ± 0.30	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	3.44 ± 0.69		5.03 ± 1.71		6.74 ± 1.83	1.48 ± 0.48	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
3	FC	2.94 ± 0.50		6.55 ± 2.05		8.02 ± 2.18	2.23 ± 0.62	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	3.19 ± 0.50		7.15 ± 1.90		8.74 ± 2.03	2.26 ± 0.57	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	2.98 ± 0.50		6.74 ± 2.14		8.23 ± 2.26	2.28 ± 0.67	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	3.12 ± 0.50		6.93 ± 1.96		8.49 ± 2.08	2.23 ± 0.58	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	2.97 ± 0.45		6.74 ± 2.08		8.22 ± 2.21	2.29 ± 0.64	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	2.93 ± 0.50		6.60 ± 2.12		8.07 ± 2.24	2.26 ± 0.66	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.03 ± 0.48		6.77 ± 1.92		8.29 ± 2.03	2.25 ± 0.61	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	2.93 ± 0.50		6.80 ± 2.12		8.28 ± 2.24	2.33 ± 0.68	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
5	FC	2.49 ± 0.56		8.46 ± 1.94		9.58 ± 2.07	3.58 ± 1.23	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	2.51 ± 0.56		7.79 ± 2,08		8.96 ± 2.18	3.25 ± 1.23	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	2.50 ± 0.63		8.56 ± 2.20		9.76 ± 2.20	3.75 ± 1.83	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	2.48 ± 0.55		7.79 ± 2.08		8.93 ± 2.17	3.28 ± 1.23	9 / 9 ( 100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	2.48 ± 0.62		8.55 ± 2,20		9.74 ± 2.20	3.77 ± 1.83	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	2.44 ± 0.62		8.56 ± 2.23		9.75 ± 2.22	3.84 ± 1.86	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.14 ± 0.48		7.20 ± 1.87		8.77 ± 1.98	2.31 ± 0.59	10 / 10 (100/0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	2.45 ± 0.62		8.59 ± 2.23		9.76 ± 2.22	3.84 ± 1.86	10 /10 (100.0)	10 / 10 (100.0)

FC1: 냉동계육, CC2: 냉장계육, FP3: 냉동돈육, CP4: 냉장돈육, FGP5: 냉동분쇄돈육, FB6: 냉동우육, CB7: 냉장우육, FGB8: 냉동분쇄우육, 각 시료의 코메트세포 측정 평균치 ± 표준편차.(p<0.05), 시료 당 측정된 코메트세포 수(n=300), 전체 시료 수: 320(식육 종류 별 각 각 40개)

10.2.2 광자극발광법(Photostimulated Luminescence, PSL)

가. 시험법 적용범위

건조향신료(단, 육두구, 후추, 정향 제외), 고춧가루, 마늘, 양파에 적용한다.

나. 분석원리

식품에 혼입된 이물질인 광물질의 발광 특성을 이용하는 방법으로서 광물질은 조사처리에 의하여 에너지가 저장되고 일정온도의 적외선에 노출되면 에너지를 방출하는데 이때 방출하는 빛의 양을 측정하여 조사처리 여부를 판정하는 방법이다.

다. 장치 및 기구

1) 광자극발광분석장치(PSL system)：시료 챔버(sample chamber), 광자극원 (Stimulation source), 광물질측정시스템으로 구성된다.

2) 페트리접시(플라스틱, 지름 50 mm)

3) 무균대

라. 표준검체

1) 조사검체：5～10 kGy사이의 선량으로 조사처리된 파프리카분말 250 g

2) 비조사검체：조사처리 되지 않은 파프리카분말 250 g

마. 검체조제

1) 모든 검체조제는 차광조건으로 무균대에서 한다.

2) 검체는 마늘, 양파의 경우 껍질을 페트리접시에 담을 수 있는 크기로 절단하고, 분말검체 및 기타검체의 경우는 골고루 혼합하여 페트리접시에 바닥이 보이지 않도록 고르게 펼쳐 담는다. 각 검체에 대하여 2개의 검체를 조제한다.

바. 시험조작

1) 모든 시험조작은 차광조건에서 한다.

2) 검체가 담긴 페트리접시를 PSL 기기에 넣어 60초 동안 방출되는 광자를 측정하며 2개 검체에 대한 측정값들을 최종 측정값으로 한다(예：400, 430). 다만, 2개의 측정값 간에 7) 판정이 다를 때에는 4회 추가시험을 하여 총 6회 측정값 중 가장 높은 2회 측정값을 최종 측정값으로 한다.

사. 판정

1) 일반적으로 광자극발광법(PSL)은 조사처리 여부를 스크리닝할 때 사용하는 방법으로서 측정값이 T1(700 count/60초) 미만이면 음성대조시료(Negative, 조사처리 되지 않은 검체)로 판정하고, T2(5,000 count/60초) 초과이면 양성검체(Positive, 조사처리된 검체)로 한다.

2) 측정값이 T1～T2의 값을 나타내면 중간검체(Intermediate, 조사처리 여부를 판단할 수 없는 검체)로 한다.

3) 양성검체와 중간검체는 최종 확인시험으로 10.2.3 열발광법에 따라 시험하여 그 결과의 판정에 따른다.

10.2.3 열발광법(Thermoluminescence, TL)

가. 시험법 적용범위

1) 광자극발광법에 따라 판정할 경우 열발광법이 요구되는 대상 식품

2) 후추, 육두구, 정향, 밤, 버섯(건조 포함), 감자, 건조채소류(분말 포함), 향신료조제품, 곡류(분말 포함), 두류(분말 포함), 어류분말, 패류분말, 갑각류분말, 된장분말, 고추장분말, 간장분말, 전분, 효모식품, 효소식품, 알로에분말, 인삼(홍삼 포함) 제품류, 복합조미식품, 조류식품, 조미건어포류, 특수의료용도등식품, 분말차, 침출차, 소스류, 2종 이상이 혼합된 식품과 광물질(silicate minerals)이 분리가 가능한 식품에 적용한다.

나. 분석원리

열발광법(ThermoLuminescence, TL)은 식품에 혼입된 이물질인 광물질의 발광 특성을 이용하는 방법으로서 광물질은 조사처리에 의하여 에너지가 저장되고 일정온도의 열에 노출되면 에너지를 방출하는데 이때 방출하는 빛의 양을 측정하여 조사처리 여부를 판정하는 방법이다.

다. 장치 및 기구

1) 열발광분석장치(Thermoluminescence detection system)

2) 측정용기：검체측정용 컵(지름 9 mm～10 mm, 두께 0.25～0.5 mm 정도) 또는 스테인리스 디스크

3) 초음파장치

4) 나일론 여과포(pore size 125 μm 또는 250 μm)

5) 원심분리기

6) 건조기：50 ± 5℃

7) 재조사 처리 장치(60Co, 전자선발생장치)

라. 용어의 정의

1) TL 강도：주어진 온도상승률에 따라 온도범위에서 검출된 빛의 양

2) 글로우곡선(Glow curve)：온도에 따른 TL 강도의 변화

3) 글로우 1(Glow 1)：광물질로부터 측정한 글로우곡선(glow curve)

4) 글로우 2(Glow 2)：글로우 1을 측정한 광물질에 조사할 선량(일반적으로 1 kGy, 저선량인 감자, 마늘, 양파의 경우 0.25 kGy의 선량을 이용함)으로 재조사(re-irradiation)하고 동일한 조건으로 측정한 글로우곡선(glow curve)

5) TL 비(TL ratio)：주어진 온도범위에서 글로우 2의 TL 강도 면적값에 대한 글로우 1의 TL 강도 면적값의 비(글로우 1의 TL 강도 면적값／글로우 2의 TL 강도 면적값) 일반적으로 온도범위는 150～250℃ 범위가 적용되나, 기기가 바뀌거나 명확하지 않을 경우 표준광물질을 사용하여 글로우곡선(glow curve)을 측정하여 온도범위를 설정할 수 있음

6) 공시험：검체없이 검체조제 과정과 시험조작 과정을 행하는 것

7) 최저검출한계(Minimum Detectable Integrated TL-intensity Level, MDL)：공시험 글로우 1의 평균값+(표준편차×3)

마. 시약 및 시액

1) 텅스텐산나트륨(Sodium polytungstate) 용액(Na6[H2W12O40]․H2O)：텅스텐산나트륨 용액에 증류수를 혼합하여 밀도를 2.0 g/mL로 한다.

2) 실리콘스프레이

3) 염산(HCl) : 1N, 4N, 6N

4) 암모니아수(NH4OH)：1N 암모니아수

5) 아세톤：액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

바. 검체조제：광물질(silicate minerals)의 분리

1) 모든 검체조제는 차광조건에서 한다.

2) 검체 100 g(단, 소스류 200 g, 2종 이상이 혼합된 식품 300 g, 밤 500 g, 생버섯 500 g, 곡류 500 g, 두류 500 g 등 시료에 혼입된 광물질의 양에 따라 결정)을 증류수 적당량에 넣고 표면에 붙은 광물질이 분리되도록 5분간 초음파 처리한다. 단, 어류분말, 패류분말, 갑각류분말 등이 포함된 경우 검체를 둥근바닥플라스크에 취하고 적당량의 6N 염산을 넣은 후 100~120℃에서 2～3시간 환류냉각처리를 할 수 있다. 이 경우 냉각시킨 후 적당량의 증류수를 가하여 희석시킨다.

3) 검체를 증류수와 함께 나일론 여과포로 500～1,000 mL의 비커를 사용하여 여과하고, 여액을 5분 동안 방치하여 광물질을 침전 시킨 다음 물과 유기물을 제거한다(광물질과 소량의 유기물이 남을 때까지 이 과정을 반복한다).

침전물을 원심분리용기에 옮겨 실온에서 5분 동안 방치하거나, 1분 동안 원심분리(1,000 G)하여 광물질을 침전 시킨 다음 물을 제거한다.

4) 원심분리용기에 남은 광물질에 텅스텐산나트륨 용액 5 mL를 넣어 혼합하고 초음파 처리한 후 2분 동안 원심분리(1,000 G) 한다.

5) 증류수 5 mL를 조심스럽게 첨가하여 방치한 후 물과 유기물을 제거한다. 다시 텅스텐산나트륨 용액 5 mL를 넣어 혼합한 후 증류수 3～5 mL를 가하여 정치한 후 물을 제거한다.

6) 텅스텐산나트륨 용액을 따라 버리거나 진공펌프를 이용하여 흡입 제거한다.

7) 소량 남아 있는 텅스텐산나트륨용액을 제거하기 위하여 증류수 5 mL를 가하여 희석한 후 물을 제거한다. 이 과정을 2회 반복한다.

8) 1 N 염산 2 mL를 가하고 10 분간 방치한다. 단, 6N 염산을 처리 한 경우 이 과정을 생략한다(광물질의 함량이 많은 감자의 경우 4 N 염산 5 mL 이상을 사용할 수 있다).

9) 1 N 암모니아수 2 mL를 가하여 혼합하고 10분간 방치한다. 단, 6N 염산을 처리 한 경우 이 과정을 생략한다.

10) 증류수 5 mL를 가하여 세척한 후 제거하는 과정을 2～3회 반복한다.

11) 아세톤 5 mL를 가하여 세척하고 제거하는 과정을  2～3회 반복한 후 측정용기에 옮긴다.

사. 시험조작

1) 모든 시험조작은 차광조건에서 한다.

2) 측정용기를 증류수로 세척하고 5분간 초음파 처리한 후, 아세톤으로 2～3회 세척하고 다시 5분간 초음파 처리하여 건조시킨 다음 먼지가 없는 곳에 보관한다.

3) 6) 검체조제에서 조제된 광물질 약 0.1～5.0 mg을 측정용기에 옮기고 실리콘스프레이를 사용하여 고정시킨 다음 50℃ 건조기에서 16시간 방치한다.

4) TL 측정 조건

가) 초기온도：50℃

나) 온도상승률：5℃/초

다) 최종온도：350～500℃

라) 질소(99.999% 이상)

5) 글로우 1을 측정하고, 1 kGy(혹은 0.25 kGy)로 재조사(re-irradiation)를 실시한 후 글로우 1과 동일한 조건으로 글로우 2를 측정한 후 TL 비를 구한다.

6) 공시험의 글로우 1을 측정하여 최저검출한계를 구한다.

7) 글로우 2의 TL 강도 면적값이 최저검출한계의 10배 이상이어야 하며, 미만인 경우에는 시험을 다시 한다.

아. 판정

1) 글로우곡선(glow curve)의 모양, 글로우곡선(glow curve)이 나타나는 온도범위 및 TL 비로서 조사처리 여부를 판정한다.

2) 조사처리 되지 않은 검체는 특징적인 글로우곡선(glow curve)을 나타내지 않거나 300℃ 이상에서 자연방사능에 의한 곡선을 나타낸다.

3) 조사처리된 검체는 150～250℃에서 최대강도를 보이는 글로우곡선(glow curve)을 나타낸다.

4) TL 비가 0.1 이상인 것은 조사처리된 것으로, 0.1 미만인 것은 조사처리 되지 않은 것으로 판정한다. 단, 2개 이상의 원료가 혼합되어 있는 제품의 경우 그 중 1개 또는 그 이상의 원료들이 조사처리 되었을 때 TL비가 0.1이하로 나타나 조사되지 않은 것으로 보일 수 있으나, 글로우1의 모양이 조사처리된 것으로 나타날 경우 조사처리된 것으로 판정한다.

자. 글로우곡선(glow curve)의 예

그림 1. 비조사된 검체의 글로우곡선

그림 2. 조사된 검체의 글로우곡선

그림 3. 조사 및 재조사된 동일 검체의 글로우곡선

1：글로우 1, 2：글로우 2 (1 kGy로 재조사)

10.2.4 전자스핀공명법(Electron Spin Resonance spectroscopy, ESR)

가. 시험법 적용범위

1) 셀룰로오스를 함유한 식품 : 피스타치오 껍질, 딸기

2) 결정형 당을 함유한 식품 : 건포도, 건파파야, 건망고, 건무화과

3) 뼈를 함유한 식품 : 우육, 돈육, 계육 등 뼈를 함유한 식품에 적용한다.

나. 분석원리

뼈, 셀룰로오스 및 결정형 당(crystalline sugar)을 함유한 식품에 잔존하는 조사처리로 생긴 자유라디칼(free radical)을 분광학적으로 측정하는 방법으로서, 자장에 의하여 전자가 공명한 후 방출하는 에너지의 차이를 측정하여 조사처리 여부를 판정하는 방법이다.

다. 장치

1) 엑스-대 전자스핀공명분광계(X-band ESR spectrometer) : 자석, 마이크로웨이브 브리지, 콘솔, 공극으로 구성된다.

2) g 값1) (g value) 측정장치

1) g 값은 고유의 값이며, 가해준 자장과 마이크로웨이브 주파수의 비 [(71,448×마이크로웨이브 주파수)/(자장)]로 계산됨

3) ESR 시험관(석영, 내경 4.0 mm)

4) 저울

5) 진공건조기 또는 동결건조기

라. 검체조제

1) 뼈를 함유한 식품

살을 완전히 제거한 뼈를 동결건조기에서 18시간 이상 또는 40 ℃의 진공건조기에서 3시간 이상 건조시킨 다음 적당한 조각(예: 두께 3.0～3.5 ㎜, 길이 5.0～10.0 ㎜)으로 절단하여 100 ㎎을 ESR 시험관에 넣는다.

2) 셀룰로오스를 함유한 식품

가) 견과류의 껍질은 적당한 크기(예: 직경 3.0～3.5 ㎜)로 절단하여 동결건조기에서 6시간 이상 또는 40℃의 진공건조기에서 2시간 이상 건조한 후 100 ㎎을 ESR 시험관에 넣는다.

나) 딸기는 검체 채취 후 바로 검체로 조제하고, 만약 보관 후 조제하고자 하는 경우에는 -18℃에서 보관하여야 한다. 딸기에 물을 가하고 믹서를 이용하여 분쇄한 후 씨를 침전시켜 분리한 다음 동결건조기에서 6시간 이상 또는 40℃의 진공건조기에서 2시간 이상 건조시킨 후 200 ㎎을 ESR 시험관에 넣는다.

3) 결정형 당을 함유한 식품

건조과일을 절단하여 동결건조기에서 18시간 이상 또는 40℃의 진공건조기에서 3시간 이상 건조시킨 후 100 ㎎을 ESR 시험관에 넣는다.

마. 시험조작

조제된 검체를 넣은 ESR 시험관을 전자스핀공명분광계에 있는 공극에 넣고 각각의 라디칼을 측정할 수 있는 조건으로 측정한다.

1) 전자스핀공명분광계의 측정조건

마이크로웨이브 주파수와 자장은 실험에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면

가) 뼈를 함유한 검체

(1) 마이크로웨이브 : 주파수 9.5 GHz, 파워 5～12.5 mW

(2) 중심자장 : 342 mT

나) 셀룰로오스를 함유한 검체

(1) 마이크로웨이브 : 주파수 9.78 GHz, 파워 0.4～0.8 mW

(2) 중심자장 : 348 mT

다) 결정형 당을 함유한 검체

(1) 마이크로웨이브 : 주파수 9.78 GHz, 파워 5 mW

(2) 중심자장 : 348 mT

바. 판정

1) 뼈를 함유한 식품에서 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite, [Ca10(PO4)6(OH)2]) 유래의 라디칼에 의한 g 값이 2.001～2.003(g1)과 1.997～1.999(g2)인 비대칭 신호가 나타나면 조사처리된 것으로 판정한다.

그림 1. 조사처리 되지 않은 소고기 뼈의 ESR 스펙트럼

그림 2. 7 kGy의 선량이 조사된 소고기 뼈의 ESR 스펙트럼

2) 셀룰로오스를 함유한 비조사 식품에서 나타나는 중심부의 신호 왼쪽(저자장)과 오른쪽(고자장)에 셀룰로오스 라디칼에 의해서 생성되는 한쌍의 피크가 6.0 mT의 공간을 두고 나타나면 조사처리된 것으로 판정한다.

그림 3. 조사처리 되지 않은 피스타치오의 ESR 스펙트럼

그림 4. 1 kGy의 선량이 조사된 피스타치오의 ESR 스펙트럼

3) 결정형 당을 함유한 비조사 식품에서 보이지 않던 다성분(multi component) ESR 신호(signal 1, 2, 3......)가 나타나면 조사처리된 것으로 판정한다.

그림 5. 조사처리 되지 않은 건포도의 ESR 스펙트럼

그림 6. 1 kGy의 선량이 조사된 건포도의 ESR 스펙트럼

10.2.5 기체크로마토그래프/질량분석법(Gas chromatography/Mass spectrometry)

가. 시험법 적용범위

식육, 난분 등 지방함유 식품에 적용한다.

나. 분석원리

기체크로마토그래프/질량분석법(Gas chromatography/ Mass spectrometry)은 지방질 식품에서 조사처리로 생성된 탄화수소(원래의 지방산보다 탄소수가 1개 적거나, 2개 적으면서 첫 번째 탄소위치에 새로운 이중결합을 가진 탄화수소)를 측정하여 조사처리 여부를 판정하는 방법이다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프 ․ 질량분석기(GC/MS)

2) 분쇄기

3) 원심분리기

4) 감압회전농축기

라. 시약 및 시액

1) 탄화수소 표준용액 : 탄화수소 표준품 [1-테트라데센 (C14:1), 펜타데칸 (C15:0), 1-헥사데센 (C16:1), 헵타데칸 (C17:0), 8-헵타데센 (C17:1), 1,7-헥사데카디엔 (C16:2)]을 헥산에 녹여 4 ㎍/mL가 되게 한다.

2) 내부표준용액 : n-에이코산 표준품(n-eicosane, C20:0)을 헥산에 녹여 4 ㎍/mL가 되게 한다.

3) 정제컬럼 : Florisil을 충진한 유리칼럼, Florisil SPE 카트리지(충진제 : Florisil 10 g, 용량 : 35 mL) 또는 이와 동등한 것

가) 유리칼럼에 Florisil을 충진하는 방법 : Florisil(60～100 mesh)을 550℃에서 5시간 이상 태워 상온에서 식힌 후 3% 물(물 3 g/ Florisil 100 g)을 가한 뒤 균질화하고 이를 12시간 이상 방치 후 불활성화시킨다. 불활성화 시킨 Florisil 20～25 g을 유리 칼럼(20 ㎜ × 200 ㎜)에 충진시켜 사용한다.

4) 헥산 : HPLC용 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 지방추출

가) 열처리 추출법

검체(식육 등)에서 지방이 많은 부위를 취하여 균질화시킨 후 50 g을 100 mL 원심분리용 유리관에 담고 50°C의 수조에서 가열한다. 이때 소량의 물(2～5 mL)을 첨가하면 물과 지방이 쉽게 분리된다. 지방이 완전히 녹을 때까지 유리막대로 잘 저어준 다음 물과 지방을 분리하기 위하여 원심분리(900 G, 10분)하고 물층이 혼입되지 않도록 상층액을 취한다. 만약에 추출한 지방이 적을 때는 검체를 유리막대로 저은 다음 원심분리하여 위와 동일한 방법으로 추출하여 지방을 얻는다.

나) 용매 추출법

검체(건조식육 등) 60 g에 무수황산나트륨 70 g을 첨가하여 분쇄하고 헥산 300 mL을 가하여 잘 혼합한 후 원심분리(900 G, 5분) 한다. 원심분리 후 상층액을 취하여 감압농축기로 농축(40℃, 335 mbar)하여 지방을 얻는다. 만약에 추출한 지방이 적을 때는 헥산 100 mL를 가한 후 위와 동일한 방법으로 추출하여 지방을 추가로 얻는다.

2) 탄화수소의 분리 정제

가) Florisil 칼럼 정제 : 추출한 지방 1 g에 내부표준용액 1 mL를 첨가하여 Florisil 유리칼럼에 가한다. 헥산 60 mL를 사용하여 3 mL/분의 유속으로 용출시켜 2 mL가 될 때까지 감압농축기로 농축한(40℃,  335 mbar) 후 0.5 mL까지 질소로 농축하여 기체크로마토그래프의 시험용액으로 한다.

나) SPE 카트리지 정제 : 추출한 지방 1 g에 내부표준용액 1 mL를 첨가하여 헥산으로 활성화시킨 Florisil SPE 카트리지에 가한다. 헥산 30 mL를 사용하여 2 mL가 될 때까지 회전농축기로 농축한(40℃,  335 mbar) 후 0.5 mL까지 질소로 농축하여 기체크로마토그래프의 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프의 측정조건

가) 칼럼 : DB-5column(30 m×0.32 ㎜ ID, 0.25 ㎛) 또는 이와 동등한 것

나) 주입부 : split ratio 1:20, 250℃

다) 운반기체(carrier gas) 및 유량 : 헬륨, 1.0 mL/min.

라) 오븐온도 : 60°C 에서 25°C/min 속도로 170°C 까지 승온하고, 2°C/min속도로 205°C 까지 승온하며, 10°C/min 속도로 270°C 까지 승온한다.

마) 이온화방식 : Electron impact

바) 이온화에너지: 70 eV

사) 분석할 분자량 범위: 40-350

사. 정성시험

탄화수소는 크로마토그램상(total ionization chromatogram)에 분리된 각 피크와 표준물질 [1-테트라데센 (C14:1), 펜타데칸 (C15:0), 1-헥사데센 (C16:1), 헵타데칸 (C17:0), 8-헵타데센 (C17:1), 1,7-헥사데카디엔 (C16:2)]의 머무름 시간(retention time)과 질량스펙트럼(mass spectrum)을 비교하여 확인한다.

아. 판정

지방을 조사처리하면 2 가지 형태의 탄화수소 (Cn-1 탄화수소와 Cn-2:1 탄화수소)가 생성되는데 이들의 존재여부로서 조사처리 여부를 판단하며, 식육 등의 경우 검지마커인  8-heptadecene (C17:1),  1,7-hexadecadiene (C16:2)이 존재하면, 난분의 경우 1,7-hexadecadiene (C16:2)이 존재하면 조사처리된 것으로 판단한다.

[별표 1] 1. 식물성 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)

[별표 1] 1. 중 A가014300을 다음과 같이 한다.

A가014300	대두	백태, 청태, 노란콩, 검정콩, 흑두(黑豆), 서리태, Black Beans	Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.	잎, 씨앗

[별표 1] 1. 중 A가014600을 다음과 같이 한다.

A가014600	큰노랑용담	겐티아나	Gentiana lutea Linné	뿌리 및 뿌리줄기※(겐티아나)

[별표 1] 1. 중 A가038900을 다음과 같이 한다.

A가038900	녹두	안두(安豆), 길두(吉豆), Green gram, Mung bean	Vigna radiata (L.) R.Wilczek / Phaseolus radiatus L. / Azukia radiata Ohwi	씨앗, 싹

[별표 1] 1. 중 A가049600을 다음과 같이 한다.

A가049600	돌콩	쥐눈이콩, 적은콩, 갱미두, 서목태, Wild soybean	Glycine soja Sieb. & Zucc. / Glycine ussuriensis Regel & Maack	씨앗

[별표 1] 1. 중 A가052300을 다음과 같이 한다.

A가052300	들깨	수임, 임자, Perilla	Perilla frutescens var. japonica (Hassk.) H. Hara / Melissa maxima Ard. / Perilla avium Dunn	잎, 씨앗

[별표 1] 1. 중 A가059400을 다음과 같이 한다.

A가059400	루이보스	Rooibos, Rooibos tea	Aspalathus linearis (Burm. f.) R. Dahlgren	잎

[별표 1] 1. 중 A가094900을 다음과 같이 한다.

A가094900	백리향	사향초, Five-rib thyme, Fiveribbed thyme	Thymus quinquecostatus Celak.	전초※(사향초)

[별표 1] 1. 중 A가105100을 다음과 같이 한다.

A가105100	소나무	Korean red pine	Pinus densiflora Sieb & Zucc.	순, 줄기, 나무껍질, 가지, 잎, 꽃가루

[별표 1] 1. 중 A가118500 및 A가118600을 각각 다음과 같이 한다.

A가118500	알로에사포나리아	-	Aloe saponaria Haw	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함) 제외]
A가118600	알로에아보레센스	알로에 아르보레스켄스, Aloe mutabilis	Aloe arborescens Miller	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함) 제외]

[별표 1] 1. 중 A가131900을 다음과 같이 한다.

A가131900	용안	용안육, Longan	Dimocarpus longan Loureiro	헛씨껍질※(용안육)

[별표 1] 1. 중 A가185000을 다음과 같이 한다.

A가185000	잇꽃	홍화, False saffron, bastard saffron, Safflower	Carthamus tinctorius	잎, 씨앗

[별표 1] 1. 중 A가307200을 삭제한다.

[별표 1] 2. 동물성 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위

[별표 1] 2. 중 A나004200, A나056600, A나066300, A나0091000을 삭제한다.

[별표 1] 3. 미생물 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	비고

[별표 1] 4. 기타 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위

[별표 2] 1. 식물성 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위 (생약명)	사용조건

[별표 2] 1. 중 B가006000을 다음과 같이 한다.

B가006000	산조	산조인	Zizyphus jujuba Miller var. spinosa Hu ex H. F. Chou	산대추 씨앗※(산조인)	-

[별표 2] 1. 중 B가008700을 다음과 같이 한다.

B가008700	옻나무	칠목, Chinese Sumac	Rhus verniciflua Stokes	줄기, 가지	동 공전 제2, 1, 1), (10) 옻나무의 사용기준에 따름

[별표 2] 1. 중 B가009600을 다음과 같이 한다.

B가009600	인동덩굴	금은화, 인동, 눙박나무, Golden-and-silver flower	Lonicera japonica Thunberg	꽃봉오리※(금은화), 잎 및 줄기※(인동)	-

[별표 2] 1. 중 B가010500을 다음과 같이 한다.

B가010500	죽력	솜대, 왕대	Phyllostachys nigra Munro var. henonis Stapf / Phyllostachys bambusoides Sieb. et Zucc.	줄기에 열을 가할 때 유출되는 즙액※(죽력)	주류의 원료로만 사용

[별표 2] 2. 동물성 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위	사용조건

[별표 2] 3. 미생물 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용조건

[별표 2] 3. 중 B다000800을 다음과 같이 한다..

B다000800	Corynebacterium glutamicum	-	Corynebacterium glutamicum	복합조미식품 제조 및 알룰로오스 제조에 한함

[별표 2] 4. 기타 원료목록의 항목 명칭을 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위	사용조건

[별표 3]을 “한시적 기준‧규격에서 전환된 원료”로 하고 C000100〜C000500을  각각 다음과 같이 한다.

고유 번호	명 칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용부위	제조/사용 조건
C000100	갈색거저리유충	밀웜, Mealworm	Tenebrio molitor L.	-	-
C000200	쌍별귀뚜라미	Two-spotted cricket	Gryllus bimaculatus	-	-
C000300	장수풍뎅이 유충	-	Allomyrina dichotoma	-	-
C000400	흰점박이꽃무지유충	-	Protaetia brevitarsis	-	-
C000500	알룰로오스	알룰로스, allulose	-	-	과당류를 알칼리화 또는 효소적 방법으로 제조한 것으로 제조과정에 사용된 미생물은 최종제품에 잔류하지 않아야 함

[별표 3]을 [별표 4]]로 한다.

종전의 [별표 3], (99) 이사-디(2,4-D, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid) 중 “면실 0.1”을 “면실 0.08†”로 한다.

종전의 [별표 3], (164) 펜발러레이트(Fenvalerate) 중 “아몬드 0.2”, “호두 0.2”를 삭제하고, “견과류 0.2”를 “견과류 0.15†”로 한다.

종전의 [별표 3], (169) 펜코나졸(Penconazole) 중 “포도 0.5T”를 “포도 0.2†”로 한다.

종전의 [별표 3], (259) 피리메타닐(Pyrimethanil) 중 “배추 0.2”를 “배추 0.1”로 한다.

종전의 [별표 3] 주8. 중 “별표 3”을 “별표 4”로 한다.

종전의 [별표 4]～[별표 6]을 각각 [별표 5]～[별표 7]로 한다.

부칙

제1조(시행일) ① 이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

② 제1조제1항에도 불구하고 다음 각 호의 구분에 따른 개정규정은 다음 각 호에서 정한 날부터 시행 한다.

1. 시행일 : 2018년 10월 1일

가. [별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

2. 시행일 : 2019년 2월 1일

가. 제2. 2. 24)

나. 제2. 3. 5) (2) ④

제2조(적용례) 이 고시는 이 고시 시행 이후 최초로 제조·가공 또는 수입한 식품(선적일 기준)부터 적용한다.

제3조(경과조치) ① 이 고시는 이 고시 시행 당시 제조․가공․판매 또는 수입되어 검사가 진행 중인 사항에 대하여는 종전의 규정에 따른다.

② 제1조에도 불구하고 제7. 4.25의 개정사항은 2018년 10월 31일까지 종전의 규정에 따를 수 있다.

신․ 구조문 대비표

현  행

개  정(안)

제1. 총칙

1. 일반원칙

1) 〜 9) (생  략)

10) 식품 중 농약 또는 동물용의약품의 잔류허용기준을 신설, 변경 또는 면제 하려는 자는 [별표 6]의 “식품 중 농약 및 동물용의약품의 잔류허용기준설정 지침”에 따라 신청하여야 한다.

11) 〜 12) (생  략)

2. ∼ 3. (생  략)

4. 식품원료 분류

(생   략)

1) (생   략)

2) 동물성 원료

대분류	중분류	소분류	품 목
축산물	-	(생략)	(생략)
수산물	어류	(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
		해양 어류	1) 가오리, 가자미, 갈치, 강달이, 고등어, 꽁치, 날치, 넙치(광어), 노래미, 농어, 다랑어, 대구, 도루묵, 도미, 망둑어, 멸치, 명태, 민어, 박대, 방어, 밴댕이, 뱅어, 병어, 복어, 볼기우럭, 조피볼락(우럭), 볼락, 붕장어, 삼치, 서대, 숭어, 쌍동가리, 양미리, 임연수어, 전갱이, 전어, 정어리, 조기, 준치, 쥐치, 청어, 홍어 등 2) 심해성어류 : 쏨뱅이류(적어포함, 연안성제외), 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 체장메기(홍메기), 블랙오레오도리(Allocyttus niger), 남방달고기(Pseudocyttus maculatus), 오렌지라피(Hoplostethus atlanticus), 붉평치, 먹장어(연안성 제외), 흑점샛돔(은샛돔), 이빨고기, 은민대구(뉴질랜드계군에 한함), 은대구 등 3) 다랑어류 및 새치류 : 참다랑어, 남방참다랑어, 날개다랑어, 눈다랑어, 황다랑어, 돛새치, 청새치, 녹새치, 백새치, 황새치, 백다랑어, 가다랑어, 점다랑어, 몽치다래, 물치다래 등
	-	(생략)	(생략)
	(생략)	(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
		(생략)	(생략)
기타 동물	-	(생략)	(생략)

제1. 총칙

1. 일반원칙

1) 〜 9) (현행과 같음)

10) ------------------------

------------------------

------------------[별표 7]

------------------------

------------------------

-------------------.

11) 〜 12) (현행과 같음)

2. ∼ 3. (현행과 같음)

4. 식품원료 분류

(현행과 같음)

1) (현행과 같음)

2) 동물성 원료

대분류	중분류	소분류	품 목
축산물	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
수산물	어류	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과같음)	(현행과 같음)
		해양 어류	가오리, 가자미, 갈치, 강달이, 고등어, 꽁치, 날치, 넙치(광어), 노래미, 농어, 대구, 도루묵, 도미, 망둑어, 멸치, 명태, 민어, 박대, 방어, 밴댕이, 뱅어, 병어, 복어, 볼기우럭, 조피볼락(우럭), 볼락, 붕장어, 삼치, 서대, 숭어, 쌍동가리, 양미리, 임연수어, 전갱이, 전어, 정어리, 조기, 준치, 쥐치, 청어, 홍어, 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 먹장어, 흑점샛돔(은샛돔), 은민대구, 은대구, 다랑어류(참다랑어, 남방참다랑어, 날개다랑어, 눈다랑어, 황다랑어, 백다랑어, 가다랑어, 점다랑어), 몽치다래, 물치다래, 돛새치, 청새치, 황새치 등
	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
기타 동물	-	(현행과 같음)	(현행과 같음)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 식품원료 기준

1) (생  략)

2) 식품원료 판단기준

(1) ～ (7) (생  략)

<신  설>

(8) 한시적 인정 식품원료의 식품공전 등재 요건

① ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 인정된 식품원료는 다음의 어느 하나를 충족하면 ｢식품의 기준 및 규격｣ [별표 1] ‘식품에 사용할 수 있는 원료’의 목록 또는 [별표 2] ‘식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료’의 목록에 추가로 등재 할 수 있다.

㉮ ∼ ㉰ (생  략)

2. 제조‧가공기준

1) ∼ 23) (현행과 같음)

<신  설>

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 3) (생  략)

4) 위생지표균 및 식중독균

(1) 위생지표균

규격 항목	제품 특성		n	c	m	M
세균수	6개월 미만의 영‧유아를 대상으로 하는 가공식품	액상제품	(생 략)
		액상제품 제외	(생 략)
대장균군	6개월 미만의 영‧유아를 대상으로 하는 가공식품		(생 략)

가. 식품일반

나. ～ 다. (생  략)

(2) 식중독균

가. ～ 라. (생  략)

마. 6개월 미만의 영․유아가 섭취할 수 있도록 제조․판매하는 식품

가) (생  략)

바. (생  략)

5) 오염물질

(1) (생  략)

(2) 중금속 기준

① ～ ② (생  략)

③ 수산물

대상식품	납 (mg/kg)	카드뮴 (mg/kg)	수은 (mg/kg)	메틸수은 (mg/kg)
어류	(생략)	(생략)	0.5 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류는 제외한다)	1.0 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류에 해당된다)
연체류	(생략)	(생략)	(생략)	-
갑각류	(생략)	(생략)	-	-
해조류	-	(생략)	-	-
냉동식용 어류머리	(생략)	-	0.5 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류는 제외한다)	1.0 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류에 한한다)
냉동식용 어류내장	(생략)	(생략)	0.5 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류는 제외한다)	1.0 이하 (심해성 어류, 다랑어류 및 새치류에 한한다)

<신 설>

④ 가공식품

대상식품	납 (mg/kg)	비소 (mg/kg)	<신 설>
○ 식물성유지류, 어유, 기타동물성유지, 혼합식용유, 향미유, 가공유지, 쇼트닝, 마가린	(생략)	(생략)	-
○ 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·유아용 특수조제식품, 영아용 조제유, 성장기용 조제유	(생략)	(생략)	<신 설>
<신 설>	-	-	<신 설>
<신 설>	-	-	<신 설>

<신 설>

⑤ (생   략)

(3) 곰팡이독소 기준

① ∼ ⑤ (생   략)

대상식품	기 준(㎎/kg)
곡류 및 그것을 단순 처리한 것(분쇄, 절단 등, 다만 옥수수 및 그것을 단순처리한 것은 제외)	1 이하
옥수수 및 그것을 단순 처리한 것(분쇄, 절단 등)	2 이하
시리얼류	0.5 이하
영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식	0.2 이하
면류	0.75 이하

⑥ 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

⑦ (생  략)

(4) ∼ (10) (생  략)

6) (생  략)

제2. 식품일반에 대한 공통기준 및 규격

1. 식품원료 기준

1) (현행과 같음)

2) 식품원료 판단기준

(1) ～ (7) (현행과 같음)

(8) 한시적 기준‧규격에서 전환된 원료

① ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 식품원료로 인정된 후 식품공전에 등재되는 ‘한시적 기준‧규격에서 전환된 원료’의 목록은 [별표 3]과 같다.

② ‘한시적 기준‧규격에서 전환된 원료’로 분류된 원료는 명시된 제조(또는 사용) 조건을 준수하여야 한다.

(9) 한시적 인정 식품원료의 식품공전 등재 요건

① ｢식품등의 한시적 기준 및 규격 인정 기준｣에 따라 인정된 식품원료는 다음의 어느 하나를 충족하면 ｢식품의 기준 및 규격｣[별표 3] ‘한시적 기준‧규격에서 전환된 원료’의 목록에 추가로 등재 할 수 있다.

㉮ ∼ ㉰ (현행과 같음)

2. 제조‧가공기준

1) ∼ 23) (현행과 같음)

24) 식품 제조‧가공에 원료로 사용하는 톳과 모자반의 경우, 생물은 끓는 물에 충분히 삶고, 건조된 것은 물에 불린 후 충분히 삶는 등 무기비소 저감 공정을 거친 후 사용하여야 한다.

3. 식품일반의 기준 및 규격

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 위생지표균 및 식중독균

(1) 위생지표균

가. 식품일반

규격 항목	제품 특성		n	c	m	M
세균수	6개월 미만의 영아를 대상으로 하는 가공식품	액상제품	(현행과 같음)
		액상제품 제외	(현행과 같음)
대장균군	6개월 미만의 영아를 대상으로 하는 가공식품		(현행과 같음)

나. ～ 다. (현행과 같음)

(2) 식중독균

가. ～ 라. (현행과 같음)

마. 6개월 미만의 영아가 섭취할 수 있도록 제조․판매하는 식품

가) (현행과 같음)

바. (현행과 같음)

5) 오염물질

(1) (현행과 같음)

(2) 중금속 기준

① ～ ② (현행과 같음)

대상식품	납 (mg/kg)	카드뮴 (mg/kg)	수은 (mg/kg)	메틸수은 (mg/kg)
어류	(생략)	(생략)	0.5 이하 (아래 ㉮의 어류는 제외한다)	1.0 이하 (아래 ㉮의 어류에 한한다)
연체류	(생략)	(생략)	(생략)	-
갑각류	(생략)	(생략)	-	-
해조류	-	(생략)	-	-
냉동식용 어류머리	(생략)	-	0.5 이하 (아래 ㉮의 어류는 제외한다)	1.0 이하 (아래 ㉮의 어류에 한한다)
냉동식용 어류내장	(생략)	(생략)	0.5 이하 (아래 ㉮의 어류는 제외한다)	1.0 이하 (아래 ㉮의 어류에 한한다)

③ 수산물

㉮ 메틸수은 규격 적용 대상 해양어류 : 쏨뱅이류(적어포함, 연안성 제외), 금눈돔, 칠성상어, 얼룩상어, 악상어, 청상아리, 곱상어, 귀상어, 은상어, 청새리상어, 흑기흉상어, 다금바리, 체장메기(홍메기), 블랙오레오도리(Allocyttus niger), 남방달고기(Pseudocyttus maculatus), 오렌지라피(Hoplostethus atlanticus), 붉평치, 먹장어(연안성 제외), 흑점샛돔(은샛돔), 이빨고기, 은민대구(뉴질랜드계군에 한함), 은대구, 다랑어류, 돛새치, 청새치, 녹새치, 백새치, 황새치, 몽치다래, 물치다래

④ 가공식품

대상식품	납 (mg/kg)	비소 (mg/kg)	무기비소 (mg/kg)
○ 식물성유지류, 어유, 기타동물성유지, 혼합식용유, 향미유, 가공유지, 쇼트닝, 마가린	(현행과 같음)	(현행과 같음)	-
○ 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영·유아용 곡류조제식, 기타 영·유아식, 영·유아용 특수조제식품	(현행과 같음)	-	0.1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)
○ 특수의료용도등식품(영·유아용 특수조제식품 제외), 과자, 시리얼류, 면류	-	-	0.1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)
○ 기타식품**	-	-	1 이하* (현미, 미강, 쌀눈, 톳 또는 모자반을 사용한 식품에 한함)

* 총비소 시험결과 무기비소 기준 초과 검출 시 무기비소로 시험하여 기준 적용

** 기타식품은 영아용 조제유, 성장기용 조제유, 영아용 조제식, 성장기용 조제식, 영‧유아용 곡류조제식, 기타 영‧유아식, 특수의료용도등식품, 과자, 시리얼류, 면류를 제외한 모든 식품을 말한다.

⑤ (현행과 같음)

(3) 곰팡이독소 기준

① ∼ ⑤ (현행과 같음)

⑥ 데옥시니발레놀(Deoxynivalenol)

대상식품	기 준(㎎/kg)
곡류(옥수수 제외)	(현행과 같음)
곡류를 단순 처리한 것(분쇄, 절단 등, 다만 옥수수를 단순처리한 것은 제외)
옥수수	(현행과 같음)
옥수수를 단순 처리한 것(분쇄, 절단 등)
(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)

⑦ (현행과 같음)

(4) ∼ (10) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

7) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 농약 잔류허용기준

① 농산물의 농약 잔류허용기준은 [별표 3]과 같다. 단, 개별 기준과 그룹 기준이 있을 경우에는 개별 기준을 우선 적용한다.

② 농산물에 잔류한 농약에 대하여 [별표 3]에 별도로 잔류허용기준을 정하지 않는 경우 0.01 mg/kg이하를 적용한다.

③ (생   략)

(2) (생   략)

(3) 가공식품의 잔류농약 잠정기준적용

가공식품에 잔류한 농약에 대하여 [별표 3]에 별도로 잔류허용기준을 정하지 않은 경우 다음을 적용한다.

⓿① (생   략)

8) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류동물용의약품 기준적용

① (생   략)

② [별표 4] 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준에서 따로 식품명이 정해져 있지 않은 식용동물의 부산물(내장, 뼈, 머리, 꼬리, 발, 껍질, 혈액 등 식용이 가능한 부위)은 축산물의 경우 해당동물의 “근육(고기)”, 수산물의 경우 “어류”에 준하여 기준을 적용한다.

③ ∼ ⑤ (생   략)

(2) 식품 중 동물용의약품의 잔류허용기준은 [별표 4]와 같다.

(3) (생   략)

9) 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

(1) 해당 축수산물에 직접 사용이 허가되지 않았으나 비의도적 오염(사료, 환경오염 등)에 의한 살충제, 살균제 등 농약성분의 잔류관리를 위해 설정된 기준을 말하며 [별표 5]와 같다.

(2) (생   략)

10) (생   략)

11) 6개월 미만의 영․유아가 섭취할 수 있도록 제조․판매하는 식품의 타르색소

(생   략)

12) ∼ 15) (생   략)

16) 원유에 대한 규격

	우유(착유된 그대로의 것)	양유(착유된 그대로의 것)
세균수 및 체세포수	(생 략)	(생 략)
비중	(생 략)	(생 략)
산도	(생 략)	(생 략)
알콜시험	(생 략)	(생 략)
진애검사	(생 략)	(생 략)
관능검사	(생 략)	(생 략)
가수검사 및 가염검사	축산물 위생관리법 제4조2항의 규정에 의한 축산물의 위생등급에 관한 기준에 의함	(생 략)

17) ∼ 18) (생  략)

7) 농약의 잔류허용기준

(1) 농산물의 농약 잔류허용기준

① ------------------------

[별표 4]------------------

-------------------------

----------------.

② ----------------------

[별표 4]------------------

------------------------

------------.

③ (현행과 같음)

(2) (현행과 같음)

(3) 가공식품의 잔류농약 잠정기준적용

------------------------

-- [별표 4]---------------

------------------------

------.

⓿① (현행과 같음)

8) 동물용의약품의 잔류허용기준

(1) 식품 중 잔류동물용의약품 기준적용

① (현행과 같음)

② [별표 5] -----------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

-------------------------

---------------.

③ ∼ ⑤ (현행과 같음)

(2) ------------------------

--------- [별표 5] -----.

(3) (현행과 같음)

9) 축·수산물의 잔류물질 잔류허용기준

(1) ------------------------ ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------[별표 6]과 같다.

(2) (현행과 같음)

10) (현행과 같음)

11) 6개월 미만의 영아가 섭취할 수 있도록 제조․판매하는 식품의 타르색소

(현행과 같음)

12) ∼ 15) (현행과 같음)

16) 원유에 대한 규격

	우유(착유된 그대로의 것)	양유(착유된 그대로의 것)
세균수 및 체세포수	(현행과 같음)	(현행과 같음)
비중	(현행과 같음)	(현행과 같음)
산도	(현행과 같음)	(현행과 같음)
알콜시험	(현행과 같음)	(현행과 같음))
진애검사	(현행과 같음)	(현행과 같음)
관능검사	(현행과 같음)	(현행과 같음)
가수검사	가수하여서는 아니 된다.	(현행과 같음)

17) ∼ 18) (현행과 같음)

4. 보존 및 유통기준

1) ∼ 15) (생  략)

16) 냉동제품을 해동시켜 실온 또는 냉장제품으로 유통할 수 없다. 다만, 식품제조·가공업 영업자가 냉동제품인 빵류, 떡류, 초콜릿류, 젓갈류, 과·채주스, 또는 수산물가공품(살균 또는 멸균하여 진공 포장된 제품에 한함)에, 축산물가공업 중 유가공업 영업자가 냉동된 치즈류 또는 버터류에 냉동포장완료일자, 해동일자, 해동일로부터 유통조건에서의 유통기한(냉동제품으로서의 유통기한 이내)을 별도로 표시하여 해동시키는 경우는 제외한다.

17) ∼ 24) (생  략)

25) 제품의 유통기간 설정은 당해 제품의 제조가공업자, 식육포장처리업영업자, 식육판매업영업자, 식용란수집판매업영업자, 식육즉석판매가공업영업자, 수입업자(수입 냉장식품 중 보존 및 유통온도가 국내와 상이한 경우 국내의 보존 및 유통온도에서 유통하기 위한 경우 또는 수입식품 중 제조자가 정한 유통기한 내에서 별도로 유통기한을 설정하는 경우에 한함)가 포장재질, 보존조건, 제조방법, 원료배합비율 등 제품의 특성과 냉장 또는 냉동보존 등 기타 유통실정을 고려하여 위해방지와 품질을 보장할 수 있도록 정하여야 한다.

26) ∼ 30) (생  략)

4. 보존 및 유통기준

1) ∼ 15) (현행과 같음)

16) ----------------------- -----------------------------------------------------------------------------------------기타 수산물가공품-------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

17) ∼ 24) (현행과 같음)

25) ----------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 상이하여 국내의 보존 및 유통온도 조건에서 -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

26) ∼ 30) (현행과 같음)

제3. (생  략)

제3. (현행과 같음)

제4. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류, 빵류 또는 떡류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (4) (생  략)

(5) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

프로피온산 프로피온산나트륨 프로피온산칼슘	(생 략)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서 기준하며, 팥 등 앙금류에 한한다)

(6) (생  략)

(7) 황색포도상구균 : n=5, c=0, m=0/10g(다만, 크림을 도포 또는 충전한 빵류에 한한다.)

(8) 살모넬라 : n=5, c=0, m=0/10g (다만, 크림을 도포 또는 충전한 빵류에 한한다.)

(9) ∼ (14) (생   략)

6) 시험방법

(1) ∼ (5) (생  략)

(6) 세균수

검체를  40℃ 이하에서 될 수 있는 대로 단시간에 전부 녹여 그 10 mL를 공전병에 취하고 이에 멸균인산완충희석액 또는 멸균생리식염수를 가하여 100 mL로 한 것을 검액으로 하여 이하 제7. 일반시험법 4.미생물시험법 4.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

(7) ∼ (14) (생   략)

제4. 식품별 기준 및 규격

1. 과자류, 빵류 또는 떡류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (4) (현행과 같음)

(5) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

프로피온산 프로피온산나트륨 프로피온산칼슘	(현행과 같음)
<삭 제>	<삭 제>

(6) (현행과 같음)

(7) -----------------------  m=0/10g[다만, 크림(우유, 달걀, 유크림, 식용유지를 주원료로 이에 식품이나 식품첨가물을 가하여 혼합 또는 공기혼입 등의 가공공정을 거친 것을 말한다.)을 도포 또는 충전 후 가열살균하지 않은 빵류에 한한다.]

(8) ----------------m=0/10g [다만, 크림(우유, 달걀, 유크림, 식용유지를 주원료로 이에 식품이나 식품첨가물을 가하여 혼합 또는 공기혼입 등의 가공공정을 거친 것을 말한다.)을 도포 또는 충전 후 가열살균하지 않은 빵류에 한한다.]

(9) ∼ (14) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ∼ (5) (현행과 같음)

(6) 세균수

제7. 일반시험법 ------------  ------------------------.

(7) ∼ (14) (현행과 같음)

2. 빙과류

(생  략)

2-1 ∼ 2-2 (생  략)

2-3 빙과

1) ∼ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) 세균수

검체를 40℃ 이하에서 될 수 있는 대로 단시간에 전부 녹여 그 10 mL를 공전병에 취하고 이에 멸균인산완충희석액 또는 멸균생리식염수를 가하여 100 mL로 한 것을 검액으로 하여 이하 제7. 일반시험법 4.미생물시험법  4.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

(2) ∼ (3) (생  략)

2-4 (생  략)

3. ∼ 6. (생  략)

7. 식용유지류

7-1 ∼ 7-2 (생  략)

7-3 식용유지가공품

(1) ∼ (4) (생  략)

유형 항목	혼합식용유	향미유
(1)∼(5)	(생 략)

(5) 규격

유형 항목	가공유지	쇼트닝	마가린
(1)∼(5)	(생 략)
(6) 보존료 (g/kg)	—	—	(생 략)
			데히드로초산 데히드로초산나트륨	(생 략)
			(생 략)	(생 략)
			(생 략)	(생 략)
			(생 략)	(생 략)

유 형 규 격	모조치즈	식물성크림
(1)∼(3)	—	(생 략)

유 형 규 격	기타 식용유지가공품
(1)∼(5)	(생 략)

6) (생  략)

8. (생  략)

9. 음료류

9-1 ∼ 9-2 (생  략)

9-3 과일·채소류음료

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (6) (생  략)

(7) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	(생 략)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서, 농축과즙에 한하며, 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 또는 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소브산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.0 g/kg 이하이어야 하고, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 0.6 g/kg 이하)

6) (생  략)

9-4 ∼ 9-8 (생  략)

10. 특수용도식품

(생  략)

10-1 조제유류

1) (생  략)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 방사선조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

3) ～ 6) (생  략)

10-2 영아용 조제식

1) (생  략)

2) 원료 등의 구비요건

(1) (생  략)

(2) 원료는 방사선조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(3) ～ (4) (생  략)

3) ～ 6) (생  략)

10-3 성장기용 조제식

1) (생  략)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 방사선조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(2) (생  략)

3) ～ 6) (생  략)

10-4 영·유아용 곡류조제식

1) (생  략)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 방사선조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(2) (생  략)

3) ∼ 6) (생  략)

10-5 기타 영‧유아식

1) (생  략)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 방사선조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(2) (생  략)

3) ～ 6) (생  략)

10-6 ～ 10-8 (생  략)

11. (생  략)

12. 조미식품

(생  략)

12-1 (생  략)

12-2 소스류

1) ∼ 5) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (5) (생  략)

(6) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	(생 략)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	<신 설>
	(생 략)

6) (생  략)

12-3 ∼ 12-6 (생  략)

13. 절임류

13-1 (생  략)

13-2 절임류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (4) (생  략)

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서, 다만, 당절임, 식초절임 제외)
	(생 략)
	0.5 이하(소브산으로서, 식초절임에 한함. 안식향산, 안식향산나트륨, 안식향산칼륨 또는 안식향산칼슘과 병용할 때에는 소브산으로서 사용량과 안식향산으로서 사용량의 합계가 1.5 g/kg 이하이어야 하며, 그 중 안식향산으로서의 사용량은 1.0 g/kg 이하)
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	1.0 이하(안식향산으로서, 식초절임에 한함. 소브산, 소브산칼륨 또는 소브산칼슘과 병용할 때에는 안식향산으로서 사용량과 소브산으로서 사용량의 합계가 1.5 g/kg 이하이어야 하며, 그 중 소브산의 사용량이 0.5 g/kg 이하)

6) (생  략)

13-3 조림류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

1) ∼ 3) (생  략)

4) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서 다만, 팥 등 앙금류에 한한다)

6) (생  략)

14. (생  략)

2. 빙과류

(현행과 같음)

2-1 ∼ 2-2 (현행과 같음)

2-3 빙과

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) 세균수

제7. -------------------- ------------------------------.

(2) ∼ (3) (현행과 같음)

2-4 (현행과 같음)

3. ∼ 6. (현행과 같음)

7. 식용유지류

7-1 ∼ 7-2 (현행과 같음)

7-3 식용유지가공품

(1) ∼ (4) (현행과 같음)

유형 항목	혼합식용유	향미유
(1)∼(5)	(현행과 같음)

(5) 규격

유형 항목	가공유지	쇼트닝	마가린
(1)∼(5)	(현행과 같음)
(6) 보존료 (g/kg)	—	—	(현행과 같음)
			<삭 제> 데히드로초산나트륨	(현행과 같음)
			(현행과 같음)	(현행과 같음)
			(현행과 같음)	(현행과 같음)
			(현행과 같음)	(현행과 같음)

유 형 규 격	모조치즈	식물성크림
(1)∼(3)	—	(현행과 같음)

유 형 규 격	기타 식용유지가공품
(1)∼(5)	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

8. (현행과 같음)

9. 음료류

9-1 ∼ 9-2 (현행과 같음)

9-3 과일·채소류음료

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (6) (현행과 같음)

(7) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	(현행과 같음)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서, 농축과일즙, 과·채주스에 한하며, -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

6) (현행과 같음)

9-4 ∼ 9-8 (현행과 같음)

10. 특수용도식품

(현행과 같음)

10-1 조제유류

1) (현행과 같음)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 식품조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

3) ～ 6) (현행과 같음)

10-2 영아용 조제식

1) (현행과 같음)

2) 원료 등의 구비요건

(1) (현행과 같음)

(2) 원료는 식품조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(3) ～ (4) (현행과 같음)

3) ～ 6) (현행과 같음)

10-3 성장기용 조제식

1) (현행과 같음)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 식품조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(2) (현행과 같음)

3) ～ 6) (현행과 같음)

10-4 영·유아용 곡류조제식

1) (현행과 같음)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 식품조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(2) (현행과 같음)

3) ∼ 6) (현행과 같음)

10-5 기타 영‧유아식

1) (현행과 같음)

2) 원료 등의 구비요건

(1) 원료는 식품조사처리를 하지 않은 것이어야 한다.

(2) (현행과 같음)

3) ～ 6) (현행과 같음)

10-6 ～ 10-8 (현행과 같음)

11. (현행과 같음)

12. 조미식품

(현행과 같음)

12-1 (현행과 같음)

12-2 소스류

1) ∼ 5) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (5) (현행과 같음)

(6) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

파라옥시안식향산메틸 파라옥시안식향산에틸	(현행과 같음)
소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소스에 한한다. 파라옥시안식향산메틸 또는 파라옥시안식향산에틸과 병용할 때에는 소브산으로서 사용량과 파라옥시안식향산으로서 사용량의 합계가 1.0g/kg 이하이어야 하며, 그 중 파라옥시안식향산으로서의 사용량은 0.2g/kg 이하)
	(현행과 같음)

6) (현행과 같음)

12-3 ∼ 12-6 (현행과 같음)

13. 절임류

13-1 (현행과 같음)

13-2 절임류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (4) (현행과 같음)

(5) 보존료(g/kg) : 다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서, 절임식품에 한함)
	(현행과 같음)
	<삭 제>
안식향산 안식향산나트륨 안식향산칼륨 안식향산칼슘	------------------------------------절임식품------------------------------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1.5------------------------------------------소브산으로서의 사용량은 1.0 ------

6) (현행과 같음)

13-3 조림류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

1) ∼ 3) (현행과 같음)

4) 보존료(g/kg)∶다음에서 정하는 것 이외의 보존료가 검출되어서는 아니 된다.

소브산 소브산칼륨 소브산칼슘	1.0 이하(소브산으로서 다만, 농산물을 주원료로 한 것에 한한다)

6) (현행과 같음)

14. (현행과 같음)

15. 농산가공식품류

15-1 ∼ 15-6 (생  략)

15-7 기타 농산가공품류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (7) (생  략)

(8) 대장균 : n=5, c=1, m=0, M=10 (비살균제품 중 더 이상 가공, 가열 조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 제품 및 과·채가공품에 한한다)

(9) (생  략)

6) (생   략)

16. 식육가공품 및 포장육

16-1 햄류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 이하

(2) ∼ (9) (생  략)

6) (생  략)

16-2 소시지류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 이하

(2) ∼ (9) (생  략)

6) (생  략)

16-3 베이컨류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 이하

(2) ∼ (7) (생  략)

6) (생  략)

16-4 건조저장육류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 이하

(2) ∼ (7) (생  략)

6) (생  략)

16-5 양념육류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 이하(다만, 천연케이싱은 제외한다)

(2) ∼ (8) (생  략)

6) (생  략)

16-6 ∼ 16-8 (생  략)

17. ∼ 18. (생  략)

19. 수산가공식품류

19-1 ∼ 19-5 (생  략)

19-6 기타 수산물가공품

1) ∼ 5) (생  략)

6) 시험방법

(1) ∼ (2) (생  략)

<신   설>

<신   설>

(3) ∼ (5) (생  략)

20. ∼ 21. (생  략)

22. 즉석식품류

22-1 (생  략)

22-2 즉석섭취·편의식품류

1) ∼ 4) (생  략)

5) 규격

(1) ∼ (5) (생  략)

(6) 장염비브리오 : 1 g당 100 이하(즉석섭취식품, 신선편의식품 중 해산물 함유제품에 한한다.)

(7) ∼ (9) (생  략)

6) (생  략)

23. (생  략)

15. 농산가공식품류

15-1 ∼ 15-6 (현행과 같음)

15-7 기타 농산가공품류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (7) (현행과 같음)

(8) ----------------------  (비살균 과·채가공품과 더 이상 가공, 가열조리를 하지 않고 그대로 섭취하는 비살균제품에 -----)

(9) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

16. 식육가공품 및 포장육

16-1 햄류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 미만

(2) ∼ (9) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

16-2 소시지류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 미만

(2) ∼ (9) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

16-3 베이컨류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 미만

(2) ∼ (7) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

16-4 건조저장육류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 미만

(2) ∼ (7) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

16-5 양념육류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) 아질산 이온(g/kg) : 0.07 미만-------------------

(2) ∼ (8) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

16-6 ∼ 16-8 (현행과 같음)

17. ∼ 18. (현행과 같음)

19. 수산가공식품류

19-1 ∼ 19-5 (현행과 같음)

19-6 기타 수산물가공품

1) ∼ 5) (현행과 같음)

6) 시험방법

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(3) 산가

제7. 일반시험법 2.1.5.3.1 산가에 따라 시험한다.

(4) 과산화물가

제7. 일반시험법 2.1.5.3.5 과산화물가에 따라 시험한다.

(5) ∼ (7) (현행과 같음)

20. ∼ 21. (현행과 같음)

22. 즉석식품류

22-1 (현행과 같음)

22-2 즉석섭취·편의식품류

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 규격

(1) ∼ (5) (현행과 같음)

(6) ---------------------- -------------------------살균 또는 멸균처리 되지 않은 해산물 함유 제품에 한한다.)

(7) ∼ (9) (현행과 같음)

6) (현행과 같음)

23. (현행과 같음)

제5. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. ∼ 4. (생  략)

5. 시험방법

1) ∼ 2) (생  략)

3) 대장균

제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.8 대장균에 따라 시험한다.

4) ∼ 14) (생  략)

<신  설>

제5. 식품접객업소(집단급식소 포함)의 조리식품 등에 대한 기준 및 규격

1. ∼ 4. (현행과 같음)

5. 시험방법

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 대장균

(1) 제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.8 대장균에 따라 시험한다.

(2) 접객용음용수의 대장균 검사의 경우에는 막여과법에 의하여 시료 250 mL를 여과한 후 여과지를 EMB 평판배지 위에 올려놓고 35℃에서 하룻밤 배양한다. 전형적인 집락이 확인되면 제7. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.8.1 대장균의 정성시험 가. 한도시험에 의하여 확인동정한다.

4) ∼ 14) (현행과 같음)

※ 막여과법

1. 막여과장치 및 기구

(1) 여과막

공경 0.45 μm 이하, 직경 47 mm의 막을 사용한다.

(2) 여과장치

여과막을 끼워서 여과할 수 있게 하는 장치로 멸균 가능한 것을 사용한다.

2. 시료액의 여과

멸균된 여과장치에 여과막의 격자가 그려진 면을 위로 향하게 하여 바르게 끼우고 판넬을 클램프로 고정한 후 시료액 250 mL를 무균적으로 넣어 여과한다. 여과지는 멸균 핀셋을 사용하여 제거하여 각각의 배양배지 위에 기포가 생기지 않도록 올려놓은 후 배양한다.

제6. 검체의 채취 및 취급방법

1. 검체채취의 의의

검체의 채취는 식품위생법에 따라서 식품위생감시원이 검사대상으로부터 일부의 검체를 채취하여 기준․규격 적합여부, 오염물질 등에 대한 안전성 검사를 실시하여 그 검사결과에 따라 행정조치 등이 이루어지게 되므로 검사대상 선정, 검체채취․취급․운반․시험검사 등은 효율성을 확보하면서 과학적인 방법으로 수행하여야 한다. 따라서 검체를 채취하여 식품위생검사기관에 검사의뢰하는 것은 중요한 의의를 가지므로 식품위생감시원은 검체채취 및 취급방법 등에 대하여 충분한 지식을 가지고 그 직무를 수행하여야 한다.

2. 용어의 정의

1) ∼ 3) (생  략)

3. 검체채취의 일반원칙

1) 검체의 채취는 「식품위생법」 제32조 및 같은 법 시행령 제16조에 따른 식품위생감시원이  수행하여야 한다.

2) ∼ 4) (생  략)

5) 냉동검체, 대포장검체 및 유통중인 식품 등 검체채취결정표에 따라 채취하기 어려운 경우에는 식품위생감시원이 판단하여 수거량안에서 대표성 있게 검체를 채취할 수 있다.

6) ∼ 9) (생  략)

10) 식품위생감시원은 검사대상식품 중 곰팡이독소, 방사능오염 등이 의심되는 부분을 우선 채취할 수 있으며, 추가적으로 의심되는 물질이 있을 경우 검사항목을 추가하여 검사를 의뢰할 수 있다.

11) (생  략)

4. 검체의 채취 및 취급요령

(생  략)

1) (생  략)

2) 검체채취내역서의 기재

식품위생감시원은 검체채취시 당해 검체와 함께 제7. 일반시험법 13. 부표 13.11 검체채취내역서를  첨부하여야 한다. 다만, 검체채취내역서를 생략하여도 기준․규격검사에 지장이 없다고 인정되는 때에는 그러하지 아니할 수 있다.

3) (생  략)

4) 검체의 운반 요령

(1) ∼ (4) (생  략)

(5) 미생물 검사용 검체의 운반

① 부패․변질 우려가 있는 검체

미생물학적인 검사를 하는 검체는 멸균용기에 무균적으로 채취하여 저온(5℃± 3 이하)을 유지시키면서 24시간 이내에 검사기관에 운반하여야 한다. 부득이한 사정으로 이 규정에 따라 검체를 운반하지 못한 경우에는 재수거하거나 채취일시 및 그 상태를 기록하여 식품위생검사기관에 검사 의뢰한다.

② ∼ ③ (생  략)

(6) (생  략)

제6. 검체의 채취 및 취급방법

1. 검체채취의 의의

검체의 채취는 검사대상으로부터 일부의 검체를 채취하는 것을 의미하며, 채취된 검체의 기준․규격 적합여부, 오염물질 등에 대한 안전성 검사를 실시하여 그 검사결과에 따라 행정조치 등이 이루어지게 되므로, 검사대상 선정, 검체채취․취급․운반․시험검사 등은 효율성을 확보하면서 과학적인 방법으로 수행되어야 한다. 따라서 검체를 채취하여 식품 등 시험·검사기관 또는 축산물 시험·검사기관에 검사의뢰하는 것은 중요한 의의를 가지므로 검체채취는 검체채취 및 취급방법 등에 대한 충분한 지식을 가지고 있는 자가 그 직무를 수행하여야 한다.

2. 용어의 정의

1) ∼ 3) (현행과 같음)

3. 검체채취의 일반원칙

1) ------------ ｢식품위생법｣ 제32조 및 같은 법 시행령 제16조 또는 ｢축산물 위생관리법｣ 제13조 및 제20조의2, 같은 법 시행령 제14조 및 제20조의2에서 규정하는 자(이하 “검체채취자”라 한다.)가 수행하여야 한다.

2) ∼ 4) (현행과 같음)

5) ------------------------  -------------------------------------------------- 검체채취자가 --------------

---------------------------------.

6)  ∼ 9) (현행과 같음)

10) 검체채취자는 -------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

------------------------

--------.

11) (현행과 같음)

4. 검체의 채취 및 취급요령

(현행과 같음)

1) (현행과 같음)

2) 검체채취내역서의 기재

검체채취자는 ----------------  ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

3) (현행과 같음)

4) 검체의 운반 요령

(1) ∼ (4) (현행과 같음)

(5) 미생물 검사용 검체의 운반

① 부패․변질 우려가 있는 검체

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 식품 등 시험·검사기관 또는 축산물 시험·검사기관--------------.

② ∼ ③ (현행과 같음)

(6) (현행과 같음)

5. ∼ 6. (생   략)

5. ∼ 6. (현행과 같음)

제7. 일반시험법

1. ∼ 3. (생  략)

4. 미생물시험법

(생  략)

4.1 일반사항

4.1.1 검체의 채취

가. ∼ 사. (생  략)

아. 기타 제반사항은 제9. 검체의 채취 및 취급방법을 참고하여 따른다.

4.1.2 확인시험

가. 균의 확인시험에서 각종 생화학시험은 국제적으로 공인된 키트(kit) 또는 장비를 이용할 수 있다. 또한 필요한 경우 혈청형 확인시험, 독소 유전자 확인시험, 유전체 상동성 분석시험을 추가할 수 있다.

나. ∼ 라. (생  략)

4.2 (생  략)

4.3 시험용액의 제조

가. (생  략)

나. 미생물 정성시험을 할 때 5개 시료에서 각각 채취한 25 g(mL)을 검사하거나 5개 시료에서 25 g(mL)씩 채취하여 섞은(pooling) 125 g(mL)을 검사할 수 있다.

다. 채취한 검체는 희석액을 이용하여 필요에 따라 10배, 100배, 1,000배 등 단계별 희석용액을 만들어 사용할 수 있다. <후단 신설>

라. (생  략)

마. 검체를 용기 포장한 대로 채취할 때에는 그 외부를 물로 씻고 자연 건조시킨 다음 마개 및 그 하부 5～10 cm의 부근까지 70% 알코올탈지면으로 닦고, 화염멸균한 후 냉각하고 멸균한 기구로 개봉, 또는 개관하여 2차 오염을 방지하여야 한다.

바. ∼ 사. (생  략)

4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

(생  략)

1) ∼ 62) (생  략)

63) Baird-Parker 한천배지(Baird -Parker Agar)

(생  략)

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 50℃정도로 식힌 다음 0.1% Potassium Tellurite가 첨가된 난황액(시액 8) 50 mL을 첨가한다.

64) ∼ 96) (생  략)

<신  설>

<신  설>

<신  설>

4.4.2 (생   략)

4.5 세균수

4.5.1 일반세균수

가. ∼ 나. (생  략)

다. 자동화된 최확수법(Automated MPN)

우유류, 유당분해우유, 가공유류(유음료 제외), 조제유류, 분유류, 소 도체, 돼지 도체, 닭 도체, 오리 도체에 한한다.

4.5.2 (생  략)

4.6 세균발육시험

통·병조림, 레토르트 등 멸균제품에서 세균의 발육유무를 확인하기 위한 것이다.

가. ∼ 나. (생  략)

4.7 대장균군

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

(생  략)

1) ∼ 2) (생  략)

3) 완전시험

대장균군의 존재를 완전히 증명하기 위하여 위의 평판상의 집락이 그람음성, 무아포성의 간균임을 확인하고, 유당을 분해하여 가스의 발생 여부를 재확인한다. 확정시험의 Endo 한천배지(배지 5)나 EMB한천배지(배지 6)에서 전형적인 집락 1개 또는 비전형적인 집락 2개 이상을 각각 유당배지발효관과 보통한천배지(배지 8)에 접종하여 35∼37℃에서 48±3시간동안 배양한다. 이때 가스를 발생한 발효관에 해당되는 한천배지의 집락에 대하여 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정한다.

나. ∼ 다. (생  략)

4.7.2 정량시험

가. 최확수법

(생  략)

시험용액 접종량	0.1 mL	0.01 mL	0.001 mL	MPN
가스발생양성관수	(생 략)	(생 략)	2 개	(생 략)

(생  략)

1) ∼ 2) (생  략)

나. ∼ 다. (생  략)

라. 자동화된 최확수법(Automated MPN)

우유류, 유당분해우유, 가공유류(유음료 제외), 발효유류, 가공치즈, 조제유류, 분유류, 건조저장육류, 식육추출가공품, 알가열성형제품 검사에 한한다.

4.8 대장균

4.8.1 정성시험

가. 한도시험

4.3 제조법에 따른 시험용액 1 mL를 3개의 EC 배지에 접종하고 44.5±0.2℃에서 24±2시간 배양 후 가스발생을 인정한 발효관은 추정시험 양성으로 하고 가스발생이 인정되지 않을 때에는 추정시험 음성으로 한다.

추정시험이 양성일 때에는 해당 EC 발효관으로부터 EMB 배지에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 집락을 유당배지 및 보통한천배지로 각각 이식한다. 유당배지에 접종한 것은 35∼37℃에서 48±3시간 배양하고 보통한천배지에 접종한 것은 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 유당배지에서 가스발생을 인정하였을 때에는 이에 해당하는 보통한천배지에서 배양된 집락을 취하여 그람염색을 실시하여 그람음성, 무아포성 간균을 확인한 후 생화학 시험을 실시하여 대장균 양성으로 판정한다.

4.8.2 (생  략)

4.9 ∼ 4.10 (생  략)

4.11 살모넬라(Salmonella spp.)

가. 증균배양

1) 식품 및 식육: 시료 25 mL(g)에 225 mL의 펩톤식염완충액(Buffered Peptone Water)을 첨가하여 36±1℃에서 18～24시간 배양한 후 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10 mL의 Tetrathionate 배지(배지 87)에 1 mL를 첨가함과 동시에 10 mL의 RV 배지(배지 57) 또는 RVS 배지(배지 88)에 0.1 mL를 첨가하여 각각 36±1℃(Tetrathionate 배지) 및 42±0.5℃(RV 배지 또는 RVS 배지)에서 20～24시간 동안 증균배양한다.

2) 소, 돼지도체: 제7. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 50 mL BPW를 넣은 다음 균질화 시킨 후 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. 1차 배양액은 1) 축산물가공품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

3) 닭, 오리도체: 제7. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 다) 닭의 시료 채취방법에 따라 채취한 시료 30 mL을 취하여 30 mL BPW에 넣은 다음 균질화 시키고 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. 1차 배양액은 1) 축산물가공품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

4) 식용란: 식용란 20개를 채취하여 제7. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.3. 식용란의 시험법 5.3.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 조제에 따라 소독 한 후 말린 식용란을 깨서 4 L 용량의 멸균비이커 또는 멸균비닐백 등 적정한 용량의 멸균용기에 넣어서 준비한 다음(달걀을 깰 때는 위생장갑을 껴야하며 샘플마다 위생장갑을 바꾸어준다.) 멸균 도구 등을 이용하여 난황과 난백이 섞이도록 균질화를 시킨다. 준비된 시료에 2L의 멸균 TSB를 섞어 35℃에서 24±2시간 동안 증균한다. 1차 배양액은 1) 축산물가공품 및 식육의 2차 증균과정을 따라 증균시킨다.

나. ∼ 다. (생  략)

4.12 ∼ 4.16 (생  략)

4.17 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)

가. 증균배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 PSBB 배지(배지 44)에 가한 후 10℃에서 10일간 배양한다.

나. ∼ 다. (생  략)

4.18 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)

4.18.1 정성시험

가. 분리배양

검체 25 g 또는 25 mL를 취하여 225 mL의 희석액을 가하여 균질화한 검액을 MYP한천배지(배지 46)에 접종하여 30℃에서 24시간 배양한다. 배양후 혼탁한 환을 갖는 분홍색 집락을 선별한다. 이 때 명확하지 않을 경우 24시간 더 배양하여 관찰한다.

나. 확인시험

MYP 한천배지에서 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지(배지 8)에 접종하고 30℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 그람염색을 실시하여 포자를 갖는 그람양성 간균을 확인하고, 확인된 균은 nitrate 환원능, VP, β-hemolysis, tyrosine 분해능, 혐기배양시의 포도당 이용 등의 생화학시험을 실시하며, 추가로 30℃, 24시간 그리고 상온, 2∼3일 추가 배양하여 곤충독소단백질(Insecticidal crystal protein) 생성 확인시험주)도 실시한다.

4.18.2 정량시험

가. 균수 측정

검체 25 g 또는 25 mL를 취한 후, 225 mL의 희석액을 가하여 2분간 고속으로 균질화하여 시험용액으로 한다. 희석액을 사용하여 10배 단계 희석액을 만든다. MYP 한천평판배지(배지 46)에 단계별 희석용액 0.2 mL씩 5장을 도말하여 총 접종액이 1 mL이 되게 한 후 30℃에서 24±2시간 배양한 후 집락 주변에 lecithinase를 생성하는 혼탁한 환이 있는 분홍색 집락을 계수한다.

나. ∼ 다. (생  략)

4.19 (생  략)

4.20 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)

가. ∼ 다. (생  략)

라. 독소확인시험

<신  설>

1) 시험방법

(생  략)

2) 판정

(생  략)

가) ∼ 나) (생  략)

(1) ∼ (2) (생  략)

<신  설>

4.21 크로노박터(Cronobacter spp.)

가. (생  략)

나. 분리배양

증균배양액을 CESA 한천배지(배지 60) 또는 E. sakazakii 한천배지(배지 62)에 도말하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 배양후 CESA 한천배지에서 청록색, E. sakazakii 한천배지에서는 장파장의 자외선(366nm) 조사하에 형광을 나타내는 전형적인 집락들에 대하여 확인시험을 실시한다.

다. (생  략)

4.22 ∼ 4.24 (생  략)

4.25 식품용수 등의 노로바이러스

가. ∼ 나. (생  략)

다. 시험방법

1) ∼ 4) (생  략)

5) 노로바이러스 유전자 PCR 과정 및 결과판정

(생  략)

가) (생  략)

나) Semi-nested PCR 방법은 아래와 같이 수행한다.

(1) One-step RT-PCR 산물을 주형으로 하여 Semi-nested PCR을 실시한다. 1차 PCR산물 2 μL, 10x 완충액(MgCl2 포함) 5 μL, dNTPs(10 mM) 4 μL, Taq DNA polymerase(5 unit/μL) 1 μL, 프라이머는 GI과 GII 형(type)별로 달리하여 GI 형(type)(GI-F2, GI-R1M), GII 형(type) (GII-F3M, GII-R1M) 각 2.5 μL 첨가한 다음 최종 증류수로 총 50 μL로 맞춘 후 Semi-nested PCR을 실시한다.

(2) (생  략)

표 3. 노로바이러스 Semi-nested PCR 반응액 조성

Component	Volume	Genogroup
		GI primers	GII primers
dNTP(10mM)	(생 략)	-	-
(생 략)	(생 략)	-	-
(생 략)	(생 략)	-	-
(생 략)	(생 략)	GI-F2	(생 략)
(생 략)	(생 략)	(생 략)	GII-RIM
Taq polymerase(5 unit/μL)	(생 략)	-	-
(생 략)	(생 략)	-	-
(생 략)	(생 략)

표 4. (생  략)

(3) ∼ (4) (생  략)

표 5. 노로바이러스 PCR 프라이머 염기서열

Genogroup	Primer	Sequence(5'→3')	Application
I	(생 략)	(생 략)	(생 략)
	(생 략)	(생 략)	(생 략)
	GI-F2	ATG ATG ATG GCG TCT AAG GAC GC	(생 략)
II	(생 략)	(생 략)	(생 략)
	(생 략)	(생 략)	One-step RT PCR/ Semi-nested PCR/ Sequencing
	(생 략)	(생 략)	(생 략)
	<신 설>

다) 1차 결과 확인

(1) 아가로스 젤(agarose gel)상에서 시료에 313bp의 밴드가 있을 경우 GI 형 노로바이러스로, 310bp의 밴드가 있을 경우 GII 형 노로바이러스로 일차 확인하되, 양성대조군 GI 형은 689 bp, GII형은 686 bp로 확인되어야 한다.

(2) ∼ (3) (생  략)

라) 최종 검출 판정

(1) 염기서열 분석(DNA sequencing)을 위하여 다)의 (3)에서 정제된 DNA 1 μL를 주형으로 바이러스 유전형 및 진행방향에 따라 GI의 경우 GI-F2 및 GI-R1M, GII의 경우 GII-F3M 및 GII-R1M의 프라이머(primer)를 사용한다.

(2) (생  략)

(3) PCR 산물은 직접 염기서열 분석(DNA sequencing)하되 2종 이상의 유전자가 혼합되어 있는 경우에는 클로닝 염기서열 분석(Cloning DNA sequencing)을 재실시 한다. 염기서열 분석(DNA sequencing)에 의해 결정된 염기서열은 노로바이러스 유전자 데이터베이스와 비교하여 노로바이러스로 확인되었을 경우 검출된 것으로 최종 확인한다.

4.26 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

가. (생  략)

<신  설>

5. (생  략)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 빙과류

6.1.1 ∼ 6.1.2 (생  략)

6.1.3 식용얼음 및 어업용얼음

6.1.3.1 ∼ 6.1.3.7 (생  략)

6.1.3.8 세균수

위의 6.1.3.1에서 얻은 검체를 멸균증류수로 잘 씻고 멸균한 용기에 넣어 실온 또는 40℃ 이하의 온탕 중에서 섞으면서 전부 녹인 후 즉시 이 녹인 물의 원액, 10배액, 100배액 및 1,000배액을 만들어 제9. 일반시험법 4. 미생물시험법 4.5.1 일반세균수에 따라 시험한다.

6.1.3.9 대장균군

검액 10 mL씩 각 5본의 유당부이온배지에 접종하여 제9. 일반시험법 3. 미생물시험법 4.7 대장균군 4.7.1 정성시험 가. 유당배지법에 따라 시험한다.

<신  설>

6.2 ∼ 6.5 (생  략)

6.6 조미식품

6.6.1∼ 6.6.2.1 (생  략)

제7. 일반시험법

1. ∼ 3. (현행과 같음)

4. 미생물시험법

(현행과 같음)

4.1 일반사항

4.1.1 검체의 채취

가. ∼ 사. (생  략)

아. ------------ 제6. ----- ----------------------------.

4.1.2 확인시험

가. --- 확인시험은 --------- ---------------------- ---------------------- ---------------------- ---------------------- ---------------------- ---------------------- ----.

나. ∼ 라. (현행과 같음)

4.2 (현행과 같음)

4.3 시험용액의 제조

가. (현행과 같음)

나. ---- 정성시험에서 5개 시료를 검사하는 경우, 5개 시료에서 25 g(mL)씩 채취하여 각각 검사한다. 다만, 시료에 직접 증균배지를 가하여 배양하는 경우는 ----------------- -----------.

다. ----------------------- ---------------------------------------------------------------. 다만, 제조된 시험용액과 단계별 희석액은 즉시 실험에 사용하여야 한다.

라. (현행과 같음)

마. ----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------- 멸균한 ----------- --------------------------------------------------.

바. ∼ 사. (생  략)

4.4 배지 및 시액

4.4.1 배지

(현행과 같음)

1) ∼ 62) (현행과 같음)

63) Baird-Parker 한천배지(Baird -Parker Agar)

(현행과 같음)

------------------------ ---------------------- 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃정도로 ---------- -----------------------------.

64) ∼ 96) (현행과 같음)

97) ITC 배지(Irgasan, Ticarcillin and potassium chlorate broth)

Enzymatic digest of casein	10.0 g

Yeast extract	1.0 g

Magnesium chloride hexahydrate(MgCl2.6H2O)	60.0 g

Sodium Chloride	5.0 g

Malachite green, 0.2% aqueous solution	5.0 mL

위의 성분을 증류수 1000 mL에 녹여 pH 6.9±0.2로 조정하고, 988 mL를 취하여 121℃에서 15분간 멸균하여 식힌 후, 다음의 Supplement들을 가한다.

Supplement: Ticarcillin solution 1 mL(Ticarcillin 10 mg을 증류수 10 mL에  녹여 여과멸균한 것),  Irgasan solution 1 mL(Triclosan 10 mg을 95% Ethanol 10 mL에 녹인 것), Potassium chlorate solution 10 mL(Potassium chlorate 10 g을 증류수 100 mL에 녹여 여과 멸균한 것)

98) PEMBA한천배지(Polymyxin pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue Agar)

Enzymatic digest of casein	1.0 g

Mannitol	10.0 g

Sodium Chloride	2.0 g

Magnesium Sulfate	0.1 g

Disodium hydrogen phosphate  2.5 g

Potassium dihydrogen phosphate            0.25 g

Sodium Pyruvate	10.0 g

Bromothymol Blue	0.12 g

Agar	9∼18 g

위의 성분을 증류수 950 mL에 녹이고 pH 7.2 ± 0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다. 50°C로 식힌 다음 Polymyxin B 용액 100,000 IU와  난황액(시액 8) 50 mL를 각각 넣어 혼합한다.

99) CCI 한천배지(Chomogenic Cronobacter Isolation agar

Tryptic digest of casein	7.0 g

Yeast extract	3.0 g

Sodium chloride	5.0 g

5-bromo-4-chloro-3-indolyl-α-D-glucopyranoside  0.15 g

Sodium desoxychloate	0.25 g

Ammonium iron(Ⅲ) citrate	1 g

Sodium thiosulfate	1 g

Agar	9∼18.0 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.3 ± 0.2로 조정한 후 121°C에서 15분간 멸균한다.

4.4.2 (현행과 같음)

4.5 세균수

4.5.1 일반세균수

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 자동화된 최확수법(Automated MPN)

------------------ 가공유(무지유고형분 5.5% 미만인 제품 제외) ------------------- --------------------.

4.5.2 (현행과 같음)

4.6 세균발육시험

장기보존식품 중 통‧병조림식품, 레토르트식품에서 -----------

-----------------------.

가. ∼ 나. (현행과 같음)

4.7 대장균군

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

(현행과 같음)

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) 완전시험

----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 보통한천배지(배지 8)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 동안 배양한다. 보통한천배지의 집락에 -------- -------------------------------------------------------------------------------.

나. ∼ 다. (현행과 같음)

4.7.2 정량시험

가. 최확수법

(현행과 같음)

시험용액 접종량	0.1 mL	0.01 mL	0.001 mL	MPN
가스발생양성관수	(현행과 같음)	(현행과 같음)	1 개	(현행과 같음)

(현행과 같음)

1) ∼ 2) (현행과 같음)

나. ∼ 다. (현행과 같음)

라. 자동화된 최확수법(Automated MPN)

------------------ 가공유(무지유고형분 5.5%미만인 제품 제외)-------------------- ---------------------- 알가열제품 --------------.

4.8 대장균

4.8.1 정성시험

가. 한도시험

------------------------ ---------------------------- 44±1℃에서 --------- ------------------------------------------------------------------------------------------------.-------------------------------------------------------------------------------------------- 보통한천배지에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 보통한천배지에서 ------------- -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

4.8.2 (현행과 같음)

4.9 ∼ 4.10 (현행과 같음)

4.11 살모넬라(Salmonella spp.)

가. 증균배양

1) ----------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------41.5±1℃ --------------- -----------------------------------.

2) ----------------------- -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 식품-------------------------------.

3) ----------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 식품------------------- ---------------------.

4) ----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 식품 ------ ----------------------.

나. ∼ 다. (현행과 같음)

4.12 ∼ 4.16 (현행과 같음)

4.17 여시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)

가. 증균배양

------------------------- PSBB 배지(배지 44) 225 mL을 가하고, 동시에 PSBB 배지를 가한 검액 10 mL를 취해 ITC 배지(배지 97) 90 mL에 가한다. 각각의 검액을 25℃에서 48시간 배양한다.

나. ∼ 다. (현행과 같음)

4.18 바실러스 세레우스(Bacillus cereus)

4.18.1 정성시험

가. 분리배양

------------------------ -------------------------------------MYP한천배지(배지 46)에 접종하여 30℃, 24시간 배양하거나 PEMBA한천배지(배지 98)에 접종하여 37℃에서 24시간 배양한다. 배양 후 MYP한천배지에서는 혼탁한 환을 갖는 분홍색 집락 또는 PEMBA한천배지에서는 혼탁한 환을 갖는 청녹색 집락을 선별한다. ------------------- ----------------------.

나. 확인시험

각 배지에서 -------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------.

4.18.2 정량시험

가. 균수 측정

------------------------ -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 총 접종액이 1 mL이 되도록 3∼5장을 도말하여 -------------------- ----------------------------------------------------------------------------------.

나. ∼ 다. (현행과 같음)

4.19 (현행과 같음)

4.20 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)

가. ∼ 다. (현행과 같음)

라. 독소확인시험

1) 동물실험

가) 시험방법

(현행과 같음)

나) 판정

(현행과 같음)

(1) ∼ (2) (현행과 같음)

(가) ∼ (나) (현행과 같음)

2) PCR 반응을 통한 독소유전자 확인시험

가) 주형 유전자 준비

전형적인 집락을 취하여 멸균증류수 100 μL에 현탁한 후, 15분간 끓여 원심분리하고, 상층액 10 μL를 취하여 시료로 사용한다.

※ 상기의 방법과 동등 이상인 유전자 추출키트 및 장비를 사용할 수 있다.

toxin type	프라이머	염기서열(5‘→3’)	size (bp)
A	Foward	AGC TAC GGA GGC AGC TAT GTT	782
	Reverse	CGT ATT TGG AAA GCT GAA AAG G
B	Foward	CAG GAG AAG TGG AGC GAA AA	205
	Reverse	CTT GCG CCT TTG TTT TCT TG
E	Foward	CCA AGA TTT TCA TCC GCC TA	389
	Reverse	GCT ATT GAT CCA AAA CGG TGA
F	Foward	CGG CTT CAT TAG AGA ACG GA	543
	Reverse	TAA CTC CCC TAG CCC CGT AT

나) PCR 프라이머 염기서열

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
완충액	1 X	10 X	5 μL
dNTPs	0.2 mM	2.5 mM	4 μL
프라이머(F)	0.3 μM	10 pmol/μL	1.5 μL
프라이머(R)	0.3 μM	10 pmol/μL	1.5 μL
주형 DNA	-	-	1 μL
Taq	2 U/tube	5 U/μL	0.4 μL
총량	-	-	50 μL

다) PCR 반응액 조제

구분	온도	시간	반응회수
변성(denaturation)	95℃	30초	27회
결합(annealing)	60℃	25초
신장(extension)	72℃	1분25초
최종신장(final extension)	72℃	3분

라) PCR 반응조건

※ 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

마) 결과 확인
PCR 반응에서 각각의 보툴리눔 독소 타입별 증폭산물이 확인되는 경우 클로스트리디움 보툴리눔 독소유전자가 확인된 것으로 판정한다.

4.21 크로노박터(Cronobacter spp.)

가. (현행과 같음)

나. 분리배양

------------------------ --------------------------------------------------------------- 배양하거나 CCI 한천배지(배지 99)에 도말하여 41.5±1℃에서 24±2시간 배양한다. ------------------  ---------------------------------------- 집락, CCI 한천배지(배지 99)에서 청록색 집락 등 전형적인 집락들에 대하여 --------------------.

다. (현행과 같음)

4.22 ∼ 4.24 (현행과 같음)

4.25 식품용수 등의 노로바이러스

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 시험방법

1) ∼ 4) (현행과 같음)

5) 노로바이러스 유전자 PCR 과정 및 결과판정

(현행과 같음)

가) (현행과 같음)

나) ---------------------  ----------------.

(1) --------------------  ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- GI-F2-U -------------------------- GII-R1M-U -- --------------------------------------------------------------------.

(2) (현행과 같음)

표 3. 노로바이러스 Semi-nested PCR 반응액 조성

Component	Volume	Genogroup
		GI primers	GII primers
dNTPs(10mM)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	GI-F2-U	(현행과 같음)
(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)	GII-R1M-U
Taq DNA polymerase(5 unit/μL)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)	-	-
(현행과 같음)	(현행과 같음)

표 4. (현행과 같음)

(3) ∼ (4) (현행과 같음)

표 5. 노로바이러스 PCR 프라이머 염기서열

Genogroup	Primer	Sequence(5'→3')	Application
I	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GI-F2- U	AAT ACG ACT CAC TAT AGA TGA TGA TGG CGT CTA AGG ACG C	(현행과 같음)
II	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	(현행과 같음)	(현행과 같음)	One-step RT PCR
	(현행과 같음)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GII-R1M-U	GCG GAT AAC AAT TTC ACA CAG GCC RCC IGC ATR ICC RTT RTA CAT	Semi-nested PCR/ Sequencing

다) 1차 결과 확인

(1) -------------------- ------------ 330 bp의 -------------------------------- 332 bp의 ----------------------------------------------------------------- 706 bp, ---- 708 bp로 -----------.

(2) ∼ (3) (현행과 같음)

라) 최종 검출 판정

(1) -------------------- --------------------------------------------------------------------------------GI-F2-U ----------- --------- GII-R1M-U의 --------------------------.

(2) (현행과 같음)

(3) -------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 데이터베이스(GI, GII Reference sequence 및 NCBI blast)와 -------------.

4.26 식중독균에 대한 분자생물학적 시험법

가. (현행과 같음)

나. 크로노박터 시험법

1) 주형유전자 준비

증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후,  유전자 추출키트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.

2) Real-time PCR 프라이머 및 프로브 염기서열

프라이머/프로브	염기서열(5‘→3’)
Forward	5‘-GGG ATA TTG TCC CCT GAA ACA G-3’
Reverse	5‘-CGA GAA TAA GCC GCG CAT T-3’
Probe	5‘-FAM-AGA GTA GTA GTT GTA GAG GCC GTG CTT CCG AAA G-TAMRA-3’

3) Real-time PCR 반응액 조제

성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
Universal Master Mix	1×	2×	12.5 μL
프라이머(F)	900nM	10 pmol/μL	2.25 μL
프라이머(R)	900nM	10 pmol/μL	2.25 μL
프로브(P)	250nM	10 pmol/μL	0.625 μL
주형 DNA	-	-	5 μL
총량	-	-	25 μL

구분	온도	시간	반응회수
초기변성(Initial denaturation)	95℃	3분	-
변성(denaturation)	95℃	15초	40회
결합(annealing)	52℃	20초
신장(extension)	72℃	30초

4) Real-time PCR 반응조건

※ 상기 PCR 조건이 최적이 아닌 경우 변형하여 사용할 수 있다.

5) 결과 확인

PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되는 경우 크로노박터가 검출된 것으로 판정한다. 다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나 양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경우 재시험하여야 한다.

5. (현행과 같음)

6. 식품별 규격 확인 시험법

6.1 빙과류

6.1.1 ∼ 6.1.2 (현행과 같음)

6.1.3 식용얼음 및 어업용얼음

6.1.3.1 ∼ 6.1.3.7 (현행과 같음)

6.1.3.8 세균수

------------------------ --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 제7. ---- ---------------------------------------------.

6.1.3.9 대장균군

가. 제1법

위의 6.1.3.1에서 얻은 검체를 멸균증류수로 잘 씻고 멸균한 용기에 넣어 실온 또는 40℃ 이하의 온탕에서 섞으면서 전부 녹인 후 즉시 4.7.2 정량시험 가. 최확수법 1) 유당배지법에 따라 시험한다. 다만, 별표 1 또는 별표 2의 최확수표(/100 mL)로부터 구한 값의 1/2을 검체 50 mL 중의 대장균군수로 한다.

나. 제2법

위의 6.1.3.1에서 얻은 검체를 멸균증류수로 잘 씻고 멸균한 용기에 넣어 실온 또는 40℃ 이하의 온탕에서 섞으면서 전부 녹인 후 즉시 막여과법에 의하여 시료 50 mL를 여과한 후 여과지를 데스옥시콜레이트 유당한천배지위에 올려놓고 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 이하의 조작은 4.7.2 정량시험 나. 데스옥시콜레이트유당한천배지법에 따라 한다.

6.2 ∼ 6.5 (현행과 같음)

6.6 조미식품

6.6.1∼ 6.6.2.1 (현행과 같음)

6.6.2.2 위화물

가. ∼ 다. (생  략)

<신  설>

6.6.3 (생  략)

6.6.2.2 위화물

가. ∼ 다. (현행과 같음)

라. 식염

제7. 일반시험법 2. 식품성분시험법 2.2 미량영양성분시험법 2.2.1 무기질 2.2.1.5 식염에 따라 시험한다.

6.6.3 (현행과 같음)

6.6.4 식염

6.6.4.1 총염소

불용분에서의 시료용액 25 mL를 정확히 취하여 중성1)으로 하고 250 mL 메스플라스크에 옮겨 눈금까지 희석시킨다. 이 용액 25 mL를 정확히 비커에 취하고 10% 크롬산칼륨용액 1～2 방울을 넣고 0.1 N 질산은용액2)으로 붉은색의 침전이 나타날 때까지 적정하여 다음식에 따라 총염소를 계산한다.

총염소(Cl)(%) ＝	0.1N 질산은용액의 소비량(mL)×35.45×f
	시료의 무게(g)

f∶0.1 N 질산은용액의 농도계수

1) 시료용액이 알카리성일 때는 질산으로, 산성일 때는 암모니아수로 중화한다.

2) 0.1 N 질산은용액 만드는 법∶질산은 약 17 g을 1,000 mL의 물에 용해하여 크롬산칼륨을 지시약으로 하고 0.1 N 염화나트륨 표준용액으로 적정하여 그 농도계수를 결정하여 사용한다.

6.6.4.2 (생  략)

6.6.4.3 황산이온

불용분에서의 시료용액 25 mL를 정확히 비커에 넣고 50 mL 되게 희석한 염산(1∶1)을 가하여 산성으로 하고, 끓인 후 5% 염화바륨용액을 서서히 가하여 물중탕에서 가열한다. 약 2시간 가열하고 정량용 거름종이에 여과한다. 잔류물은 더운물로 염소반응이 일어나지 않을 때까지 충분히 씻고 잔류물을 여과지와 함께 건조한다. 이를 도가니에 넣고 탄화시켜 강열, 회화하고 냉각한 후 무게를 달아 다음식에 따라 황산이온을 계산한다.

황산이온(SO4)(%) ＝	찌꺼기의 무게(g)×0.4115	× 1,000
	시료의 무게(g)

6.6.4 식염

6.6.4.1 총염소

시료 10 g을 정밀히 달아 비커에 넣고 약 200 mL의 물에 용해시켜 미리 100～110℃에서 건조하여 항량한 유리여과기에 거르고 이 액에서 염소이온이 나오지 않을 때까지 물로 충분히 씻는다. 이 여액을 메스플라스크(250 mL)에 옮겨 눈금까지 희석한 시료용액 25 mL를 정확히 취하여 중성1)으로 하고 250 mL 메스플라스크에 옮겨 눈금까지 희석시킨다. 이 용액 25 mL를 정확히 비커에 취하고 10% 크롬산칼륨용액 1～2 방울을 넣고 0.1 N 질산은용액2)으로 붉은색의 침전이 나타날 때까지 적정하여 다음식에 따라 총염소를 계산한다.

총염소(Cl)(%) ＝	0.1N 질산은용액의 소비량(mL)×35.45×f
	시료의 무게(g)

f∶0.1 N 질산은용액의 농도계수

1) 시료용액이 알카리성일 때는 질산으로, 산성일 때는 암모니아수로 중화한다.

2) 0.1 N 질산은용액 만드는 법∶질산은 약 17 g을 1,000 mL의 물에 용해하여 크롬산칼륨을 지시약으로 하고 0.1 N 염화나트륨 표준용액으로 적정하여 그 농도계수를 결정하여 사용한다.

6.6.4.2 (현행과 같음)

6.6.4.3 황산이온

시료 10 g을 정밀히 달아 비커에 넣고 약 200 mL의 물에 용해시켜 미리 100～110℃에서 건조하여 항량한 유리여과기에 거르고 이 액에서 염소이온이 나오지 않을 때까지 물로 충분히 씻는다. 이 여액을 메스플라스크(250 mL)에 옮겨 눈금까지 희석한 시료용액 25 mL를 정확히 비커에 넣고 50 mL 되게 희석한 염산(1∶1)을 가하여 산성으로 하고, 끓인 후 5% 염화바륨용액을 서서히 가하여 물중탕에서 가열한다. 약 2시간 가열하고 정량용 거름종이에 여과한다. 잔류물은 더운물로 염소반응이 일어나지 않을 때까지 충분히 씻고 잔류물을 여과지와 함께 건조한다. 이를 도가니에 넣고 탄화시켜 강열, 회화하고 냉각한 후 무게를 달아 다음식에 따라 황산이온을 계산한다.

황산이온(SO4)(%) ＝	찌꺼기의 무게(g)×0.4115	× 1,000
	시료의 무게(g)

6.6.4.4 사분

시료 2～5 g을 취해 물 100 mL에 용해시키고 염산 10 mL를 가한 후 1시간 동안 열판위에서 가열한다. 실온까지 식힌 후 여과지(5C)로 여과하고 불용분을 염소이온이 검출되지 않을 때까지 물로 씻는다. 미리 항량시킨 도가니(850℃에서 강열 후 냉각시킨 것)에 여과지와 불용분을 옮기고 850℃에서 회화시킨 후 데시케이터에서 실온으로 냉각시켜 도가니의 무게를 달아 사분의 함량을 계산한다.

<삭  제>

6.6.4.5 (생 략)

6.7 (생 략)

6.8 농산가공식품류

6.8.1 ～ 6.8.2 (생  략)

6.8.3 효소식품

6.8.3.1 α-아밀라아제

가. 분석원리

검체 중 α-아밀라아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 전분으로부터 포도당 1 mg을 분해해내는데 필요한 α-아밀라아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 포도당의 양을 검체 1 g이 함유하는 α-아밀라아제의 역가(Unit/g)로 환산한다.

6.8.3.2 프로테아제

가. 분석원리

검체 중 프로테아제의 정량분석 값은 역가(Unit)로 나타내며, 1 역가(Unit)는 시험용액 조제 조건에서 1분간 카제인으로부터 L-티로신 1 mg을 분해해내는데 필요한 프로테아제의 양으로 정의한다. 검량선을 통해 산출된 시험용액 중 L-티로신의 양을 검체 1 g이 함유하는 프로테아제의 역가(Unit/g)로 환산한다.

나 ～ 바 (생  략)

사. 효소의 역가 계산

검량선을 통해 산출된 시험용액 중 L-티로신의 양을 아래 식과 같이 검체 1 g이 함유하는 프로테아제의 역가(Unit/g)로 환산하여 계산한다.

역가(Unit/g) =	시험용액 중 L-티로신 양(μg/mL) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 4(4 mL 중 1 mL 발색 반응) ✕ 시험용액 희석배수
	20(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

6.6.4.4 (현행과 같음)

6.7 (현행과 같음)

6.8 농산가공식품류

6.8.1 ～ 6.8.2 (현행과 같음)

6.8.3 효소식품

6.8.3.1 α-아밀라아제

가. 분석원리

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

1 μg을 --------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-------------

6.8.3.2 프로테아제

가. 분석원리

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

1 μg을 --------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

-------------

나 ～ 바 (현행과 같음)

사. 효소의 역가 계산

--------------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

역가(Unit/g) =	시험용액 중 L-티로신 양(μg/mL) ✕ 100(100 mL 중 1 mL 효소반응) ✕ 4(4 mL 중 1 mL 발색 반응) ✕ 시험용액 희석배수
	10(효소반응 시간, 분) ✕ 5(검체 무게, g)

6.9 ～ 6.10.1 (생  략)

6.10.2 가공유류

위의 6.10.1 우유류의 시험방법에 따라 시험한다. 다만, 무지유고형분은 6.10.6 농축유류의 마. 당분에 따라 시험하여 얻은 양을 감하여 무지유고형분으로 한다.

6.10.3 ∼ 6.10.5 (생  략)

6.10.6 농축유류

가. ∼ 라. (생  략)

마. 당분

제7. 일반시험법 2. 식품성분시험법 2.1. 일반성분시험법 2.14.4 탄수화물 2.1.4.1 당류 2.1.4.1.4 기기분석법에 의한 당류의 정량에 따라 시험한다. <신  설>

바. ∼ 사. (생  략)

6.10.7 ∼ 6.14 (생 략)

6.9 ～ 6.10.1 (현행과 같음)

6.10.2 가공유류

---------------------------

----------- 다만, 가공유의 무지유고형분은 ---------------

---------------------------

---------------------.

6.10.3 ∼ 6.10.5 (현행과 같음)

6.10.6 농축유류

가. ∼ 라. (현행과 같음)

마. 당분

------------------------------------------------------------------------------------------------------따라 설탕, 포도당, 과당을 시험한다.

바. ∼ 사. (현행과 같음)

6.10.7 ∼ 6.14 (현행과 같음)

7. ～ 8. (생   략)

7. ～ 8. (현행과 같음)

9. 식품 중 유해물질

9.1 (생  략)

9.1.1 ∼ 9.1.4 (생  략)

9.1.5 무기비소(Inorganic arsenic)

가.  ∼ 아. (생  략)

<신    설>

9.1.6 ∼ 9.1.11 (생  략)

9. 식품 중 유해물질

9.1 (현행과 같음)

9.1.1 ∼ 9.1.4 (현행과 같음)

9.1.5 무기비소(Inorganic arsenic)

<삭    제>

가. 시험법의 적용범위

무기비소의 기준규격이 설정된 식품에 적용한다.

나. 분석원리

검체 중 무기비소를 1% 질산용액으로 추출하여 액체크로마토그래프로 비소 종을 분리한 후 유도결합플라즈마/질량분석기로 분석한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-유도결합플라즈마/질량분석기(LC-ICP/MS)

※ 액체크로마토그래프와 유도결합플라즈마/질량분석기 연결 시 튜브 길이를 40 cm 이내로 한다.

라. 시약 및 시액

1) 표준원액 : 아비산나트륨(As(Ⅲ), Sodium arsenite, NaAsO2) 및 비산나트륨(As(Ⅴ), Sodium arsenate dibasic heptahydrate, Na2HAsO4․7H2,O) 표준품을 증류수에 녹여 각각 As로써 농도가 1,000 mg/L이 되게 한다.

2) 혼합표준용액 : 각 표준원액을 0.2% 질산용액으로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다. 단, 혼합표준용액은 분석 당일 조제하여 사용한다.

마. 시험용액의 조제

균질화한 시료 1 g(해조류 건조물의 경우 0.2 g∼1 g)을 정밀히 달아 용기(단, 유리용기는 제외)에 넣고 1% 질산용액 5 mL를 가하여 90℃에서 90분간 열탕 추출한다. 이때 초기 30분 동안 시료와 1% 질산용액이 충분히 섞이도록 5분∼10분 간격으로 격렬히 흔들어준다. 추출 후 여기에 물을 넣어 25 mL되게 한 후 잘 혼합하고 10분간 원심분리(3,000 G)한다. 원심분리 후 상층액을 적당히 취하여 다시 10분간 원심분리(3,000 G)하고 그 상층액을 멤브레인 필터(nylon, 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프의 측정조건

가) 컬럼 : C18 MG (4.6×250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 : 0.05%(v/v) 메탄올, 10 mM sodium 1-butane sulfonate, 4 mM malonic acid, 4 mM tetramethyl ammonium hydroxide(TMAH)의 혼합용액을 조제하고, 이때 용액의 pH는 10% 질산용액을 사용하여(약 1.8 mL/L) 정확히 2.7로 맞춘다.

다) 컬럼온도 : 25℃

라) 유속 : 0.75 mL/min

마) 주입량 : 10～50 μL

2) 유도결합플라즈마/질량분석기 측정조건(예)

가) RF Power : 1300～1500W

나) Nebulizer argon gas : 0.95～1.15 L/min

다) Auxillary argon gas flow : 1.2～1.5 L/min

라) Plasma argon gas flow: 15～20 L/min

마) Lens voltage : 5～10 V

바) Ion monitored : As (m/z 75), 다만, DRC mode 사용시에는 AsO (m/z 91)로 분석한다.

3) 검량선의 작성

혼합표준용액을 농도별(1～50 ppb)로 취하여 분석한 후 크로마토그램상의 As(Ⅴ)와 As(Ⅲ) 각 피크 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

4) 혼합표준용액의 크로마토그램(예)

그림 1. 혼합표준용액(각 10 ppb)의 크로마토그램

사. 정성시험

위의 시험조작조건에서 얻은 시험용액의 크로마토그램으로부터 목적원소의 질량값(m/z 75)의 피크들은 혼합표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험

정성시험과 동일한 조건에서 얻은 시험용액의 피크가 혼합표준용액 피크와 일치할 때 피크면적을 검량선에 대입하여 As(Ⅲ)와 As(Ⅴ)를 정량하고 각각의 정량값을 합하여 무기비소의 함량으로 한다.

9.1.6 ∼ 9.1.11 (현행과 같음)

9.2 곰팡이독소

9.2.1 ∼ 9.2.8 (생  략)

<신    설>

9.2 곰팡이독소

9.2.1 ∼ 9.2.8 (현행과 같음)

9.2.9 아플라톡신(B1, B2, G1, G2), 오크라톡신 A, 제랄레논, 푸모니신(B1, B2) 동시분석법

가. 시험법 적용범위

식물성 원료 및 그 가공식품

나. 분석원리

검체 중 곰팡이독소를 0.1% 개미산을 함유한 50% 아세토니트릴용액으로 추출한 후 정제 카트리지를 이용하여 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

2) 정제용 카트리지 : 곰팡이독소 다성분 분석용 SPE

3) 유리섬유여과지 : GF/A (pore size : 1.6 ㎛)

라. 시약 및 시액

1) 용매 : 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것

3) 추출용액 : 0.1% 개미산을 함유한 50% 아세토니트릴 용액

4) 표준원액 : 아플라톡신 B1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G1, 아플라톡신 G2, 푸모니신 B1, 푸모니신 B2의 표준품 각각은 메탄올로 오크라톡신 A, 제랄레논의 표준품 각각은 아세토니트릴에 용해하여 1,000 μg/mL가 되게 한다.

5) 혼합표준용액 : 각각의 표준원액을 0.1% 개미산을 함유한 50% 메탄올 용액을 사용하여 아플라톡신 B1은 0.05 μg/mL, 아플라톡신 B2는 0.125 μg/mL, 아플라톡신 G1, G2는 0.5 μg/mL, 오크라톡신 A는 0.25 μg/mL, 제랄레논은 1 μg/mL, 푸모니신 B1은 5 μg/mL, 푸모니신 B2는 10 μg/mL로 조제한 후 실험 시 적당한 농도로 희석하여 검량선을 작성한다.

6) 기타시약 : 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

검체를 분쇄하여 균질화한 후 2∼5 g을 정밀히 달아 추출용액(V1) 20      mL(액상시료의 경우 최종 20 mL가 되도록 함)를 가하고, 30분간 추출한 후 3,700 G에서 10분간 원심분리한다. 원심분리한 액을 유리섬유여과지로 여과한 후 여액(V2) 3 mL에 물을 가해 15 mL(V3)가 되게 하여 추출액으로 한다.

2) 정제

초당 1방울의 속도로 정제 카트리지를 아세토니트릴 2 mL, 물 2 mL로 활성화시킨 후 추출액(V4) 5 mL를 주입하여 통과시킨다. 이어서 물 2 mL, 10% 아세토니트릴 용액 2 mL를 같은 유속으로 통과시킨 후 정제 카트리지 내에 남아 있는 용액을 완전히 제거한다. 0.1% 개미산을 함유한 아세토니트릴 용액 2 mL, 메탄올 4 mL로 용출시킨 후 50℃에서 질소로 건고시킨다. 건고물에 0.1% 개미산을 함유한 50% 메탄올 용액 0.5∼1 mL(V5)를 가하여 용해시킨 후 필터(PTFE, 0.2 ㎛)로 여과한 액을 최종 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 칼럼 : C18(3 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 칼럼 온도 : 40℃

다) 이동상

(1) 이동상 A : 5 mM 개미산암모늄 용액(0.1% 개미산 포함)

(2) 이동상 B : 5 mM 개미산암모늄 메탄올 용액(0.1% 개미산 포함)

(3) 농도 구배 조건

시간(분)	이동상 A(%)	이동상 B(%)
0	95	5
0.5	95	5
2	60	40
9	0	100
11.5	0	100
12	95	5
15	95	5

라) 유속 : 0.5 mL/min

마) 주입량 : 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) Ionization : ESI Positive, Negative mode

나) Curtain gas : 30

다) Collision gas : 9

라) Ion spray voltage : 4,500

마) Ion source temperature : 500℃

바) Ion source gas 1 : 50

사) Ion source gas 2 : 50

아) Collision gas : N2

표 1. 액체크로마토그래프-질량분석기 분석을 위한 특성이온

분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	분자량 (MW)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, V)
아플라톡신 B1	Positve	312.27	312.97	285.1	35
				240.9	51
아플라톡신 B2	Positve	314.29	314.97	287.0	37
				258.8	41
아플라톡신 G1	Positve	328.27	328.96	199.9	45
				243.1	55
아플라톡신 G2	Positve	330.29	331.10	189.1	57
				245.1	57
오크라톡신 A	Positve	403.81	403.97	238.9	35
				102.0	95
푸모니신 B1	Positve	721.83	722.27	334.1	55
				352.2	51
푸모니신 B2	Positve	705.83	706.25	336.2	46
				318.2	46
제랄레논	Negative	318.36	317.02	174.9	-34
				131.0	-38

※ 밑줄 표시 되어 있는 것은 정량이온이며, 그 외는 정성이온임.

※ 액체크로마토그래프 분석조건 및 각 생성이온에 대한 질량분석기의 분석조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 제시된 이외의 생성이온도 적용이 가능함.

3) 표준용액 크로마토그램

Ⓐ: 아플라톡신 B1  312.97/285.1

Ⓑ: 아플라톡신 B2  314.97/287.0

Ⓒ: 아플라톡신 G1  328.96/199.9

Ⓓ: 아플라톡신 G2  331.10/189.1

Ⓔ: 오크라톡신 A  403.97/238.9

Ⓕ: 푸모니신 B1  722.27/334.1

Ⓖ: 푸모니신 B2  706.25/336.2

Ⓗ: 제랄레논  317.02/174.9

그림. 액체크로마토그래프-질량분석기의 표준용액 크로마토그램

Ⓐ: 아플라톡신 B1, Ⓑ: 아플라톡신 B2, Ⓒ: 아플라톡신 G1, Ⓓ: 아플라톡신 G2, Ⓔ: 오크라톡신 A, Ⓕ: 푸모니신 B1, Ⓖ: 푸모니신 B2, Ⓗ: 제랄레논

사. 정성시험

위의 조건으로 얻어진 표준용액 크로마토그램상의 피크 머무름 시간과 특성이온으로 시험용액의 곰팡이독소를 확인한다.

아. 정량시험

시험용액 크로마토그램상의 피크 머무름 시간과 특성이온이 표준용액과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

곰팡이독소의 함량(μg/kg)	=	C	x	V1	x	V3	x	V5
				S		V2		V4

1) 계산

C  : 검량선에서 구한 곰팡이독소의 함량(ng/mL)

S  : 시료량(g)

V1 : 추출용액의 부피(mL)

V2 : 추출용액에서 취한 여액의 부피(mL)

V3 : 최종 추출액의 부피(mL)

V4 : 추출액의 주입량(mL)

V5 : 건고물 용해용액의 부피(mL)

9.3 ∼ 9.17 (생   략)

10. 식품표시 관련 시험법

10.1 유전자변형식품의 시험법

(생  략)

10.1.1 ∼ 10.1.4 (생  략)

10.1.5 정성시험

가. ∼ 나. (생  략)

다. 시약 및 시액

1) (생  략)

2) PCR용 시약의 조제

가) ∼ 다) (생  략)

표 1. (생  략)

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	옥수수 adh1 (135 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	옥수수 hmg (79 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	NOS (151 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	Bt11 (127 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	GA21 (133 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	T25 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON810 (113 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	NK603 (143 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	NK603 (108 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	TC1507 (103 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	TC1507 (58 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON863 (152 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON863 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS59122-7 (141 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS59122-7 (84 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON88017 (100 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON88017 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR604 (142 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR604 (76 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON89034 (112 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR162 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MIR162 (92 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP098140-6 (147 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP098140-6 (80 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	3272 (141 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	3272 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87460 (85 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87460 (82 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	5307 (149 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	5307 (107 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87427 (152 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87427 (95 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS40278-9 (144 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DAS40278-9 (98 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP004114-3 (118 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	DP004114-3 (90 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87411 (112 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87411 (109 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON 87419 (184 bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	MON87419 (97bp)	(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
		(생 략)	(생 략)
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
	<신 설>	<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>
		<신 설>	<신 설>

표 3. ∼ 표 4. (생  략)

라. 시험조작(PCR)

(본문 생략)

① 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인된 경우 : RRS,　MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, SYHTOH2,  DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, Bt11, GA21, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, DP098140-6, 3272, MON87460, 5307, MON87427, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419(이상 옥수수)

② 35S 프로모터 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, A2704-12, DP356043-5, DP305423-1, A5547-127, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP098140-6, DAS-40278-9, DP004114-3, MON87411, MON87419(이상 옥수수)

③ NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물만 확인된 경우: MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, FG72, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS81419-2, MON87751(이상 콩), GA21, MIR604, MIR162, DP098140-6, 3272, 5307, DAS-40278-9, MON87419(이상 옥수수)

④ 35S 프로모터와 NOS 종결인자(terminator) 특이 PCR 산물이 모두 확인되지 않은 경우 : MON89788, DP356043-5, DP305423-1, MON87701, CV127, MON87705, MON87708, MON87769, DAS-44406-6, DAS-68416-4, DAS-81419-2, MON87751(이상 콩), DP098140-6, DAS-40278-9, MON87419(이상 옥수수)

1) ∼ 3) (생  략)

마. (생  략)

바. 분석 결과의 판정 및 처리

1) ∼ 2) (생  략)

3) 유전자변형 이벤트 중 35S 프로모터 및 NOS 종결인자(terminator)를 모두 사용하는 것으로는 RRS, SYHTOH2, Bt11, NK603, MON863, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427이 있고,  35S 프로모터를 사용하는 것으로는 RRS, SYHTOH2, A2704-12, A5547-127, Bt176, Bt11, T25, MON810, NK603, TC1507, MON863, DAS59122-7, MON88017, MON89034, MON87460, MON87427, DP004114-3, MON87411이 있으며, NOS 종결인자(terminator)를 사용하는 것으로는 RRS, SYHTOH2, FG72, Bt11, GA21, NK603, MON863, MON88017, MIR604, MON89034, MIR162, 3272, MON87460, 5307, MON87427이 있다.

4) (생  략)

10.1.6 ∼ 10.1.14 (생  략)

10.2 방사선 조사식품 확인시험

10.2.1 유전자코메트 분석법(스크리닝검사법)

이온화 방사선조사는 세포의 유전자에 손상을 일으키며 이러한 유전자의 손상된 정도를 단일세포의 마이크로젤 전기영동법을 이용하여 코메트 세포를 측정함 으로써 방사선 조사 여부를 검지하는 방법이다.

가. 장치 및 기구

1) 형광항체현미경(FITC Filter 494nm)

2) 전기영동장치

3) 코메트슬라이드

나. 시약 및 시액

1) 20 mM EDTA-PBS

2) Trypan blue stain

3) Low Melting Point Agarose

4) Lysis Solution : 2.5 M NaCl, 100 mM EDTA, 10 mM Tris base, 1% sodium lauryl sarcosinate, 0.01% TritonX-100, 10% Dimethyl Sulfoxide

5) TBE Buffer : 90 mM Tris -borate, 3 mM EDTA, pH 8.5

6) TE Buffer : 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5

7) SYBR Green 형광염색액

다. 대상시료 : 냉동 및 냉장 식육(우육, 돈육, 계육)

라. 검체조제

1) 시료의 표층부분을 제거한 후, 예리한 메스날 등을 사용하여 육중심부의 근육조직을 얇게 잘라내어 약 1 g 정도 채취하고 이를 교차하면서 잘게 세절 하여 다진 다음 냉장된 20 mM EDTA-PBS에 1:10의 비율(w/v)로 부드럽게 혼합한다.

2) 이를 200 ㎛ 및 100 ㎛ 나이론망으로 2회 여과한 다음 trypan blue stain(0.4%)용액 으로 염색하여 살아 있는 세포수를 계산하고 냉장 PBS로 약 105 cell/mL이 되도록  세포수를 조정한다.

마. 시험조작

1) 세포 부유액을 42℃로 유지된 0.5% Low Melting Point Agarose와 약 1:10(v/v) 비율로 혼합한 즉시 약 50 μL를 채취하여 신속하게 코메트슬라이드에 고르게 펴고 약 5℃ 냉암소에서 10분간 경화한다.

2) 이를 약 5℃ 냉암소에서 세포용해액(Lysis Solution)에 완전히 침지된 상태로 약 28분 동안 반응시킨다.

3) 코메트슬라이드와 경화된 agar 주변의 세포용해액을 흡수지로 신속하게 제거한 후, TBE Buffer(pH 8.5)에 완전히 침지하여 약 5분 동안 2회 반복하여 완충시킨다.

4) 즉시 코메트슬라이드를 TBE Buffer(pH 8.5)로 채워진 전기영동조에 넣어 완전히 침지시킨 상태에서 전압 1 V/㎝(예: 27㎝ 길이의 전기영동조의 경우 전압은 약 27V, 전류는 약 28 mA) 조건으로 19분 동안 전기영동 시킨다.

5) 전기영동 후 즉시 코메트슬라이드 위에 미리 준비한 형광염색용액 두 세 방울을 떨어뜨려 형광염색한다. 형광염색용액은 SYBR Green을 DMSO로 약 10배 희석하여 냉동(－20℃ 이하)보관하고 이를 사용 할 때에 TE Buffer로 희석 (1:1000, v/v)하여 사용한다.

바. 판정

1) 형광항체현미경(FITC Filter 494 nm) 100배에서 200배 확대 비율로 전체적인 코메트세포의 형태를 관찰하여 방사선조사 여부를 일차적으로 판단한다(그림 1.).

가) 코메트세포(comet cell)의 형태가 원형 또는 난원형을 띠면서 comet tail 현상이 전체적으로 일정하게 나타나는 경우 방사선이 조사된 것으로 판단한다.

나) 코메트세포(comet cell)의 형태가 원형 또는 난원형을 띠면서 코메트꼬리 (comet tail) 현상이 거의 나타나지 않는 경우 방사선이 조사되지 않은 것으로 판단한다.

그림 1. 방사선조사 비조사 육류(좌)와 조사된 육류(우)의 코메트세포(형광항체현미경 200배)

2) 1)의 가)과 같이 방사선 조사된 것으로 판단된 시료에 대해서는, 형광항체 현미경 200배에서 눈금자(1 ㎝ 길이, 눈금단위 10 ㎛)가 있는 대안렌즈를 사용하여 코메트슬라이드의 중앙부분에 위치한 comet cell(시료 하나에 75개 이상)의 Comet head 직경과 Comet tail(comet head 중간 부분에서 comet tail 끝 부분까지의 길이)의 길이를 신속하게 측정한 다음, comet tail의 길이에 대한 comet head 직경의 비율을 계산하여 다음의 기준에 따라 방사선 조사 여부를 판정한다(표 1.).

가) 1)의 가)에 해당되고 comet head의 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 1 kGy 조사 시료의 평균치 이상인 경우에는 양성으로 판정하고, 전자스핀공명법이나 가스크로마토그라프/질량분석법을 적용하여 방사선조사 여부를 최종 판정한다.

나) 1)의 나)에 해당되고 comet head의 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 비 조사 시료의 평균치 이내인 경우(음성), 방사선이 조사되지 않은 것으로 판정한다.

다) 부분적인 comet tail 현상이 나타나고 comet head 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 방사선 비 조사 시료의 평균치 이상에서 1 kGy 조사된 시료의 평균치 이하의 범위에 해당되는 경우 의양성으로 판정하고, 재 실험을 실시하여 다시 의양성으로 판정되는 경우에는 방사선이 조사되지 않은 것으로 판정한다.

표 1. 방사선조사 육류의 코메트 세포 측정 및 흡수선량 평가 결과

선량(kGy)		코메트세포 (μm)					코메트꼬리/ 코메트머리	선량평가(%)	검지정확도(%)
		코메트머리 (직경)	코메트꼬리 (길이)		전체 길이			정확히 평가된 시료 수 / 시료 수(%)	정확히 검지된 시료 수 / 시료 수(%)
0	FC1	3.91 ± 0.91		2.63 ± 0.52		4.58 ± 0.73	0.71 ± 0.20	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CC2	3.94 ± 0.88		2.55 ± 0.51		4.52 ± 0.74	0.67 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP3	4.0 ± 0.88		2.62 ± 0.52		4.62 ± 0.73	0.68 ± 0.19	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP4	4.07 ± 0.90		2.57 ± 0.53		4.60 ± 0.18	0.66 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP5	4.04 ± 0.87		2.67 ± 0.57		4.69 ± 0.78	0.69 ± 0.19	9 / 10 ( 90.0)	9 / 10 (90.0)
	FB6	4.07 ± 0.88		2.63 ± 0.54		4.66 ± 0.76	0.67 ± 0.19	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB7	3.96 ± 0.89		2.56 ± 0.52		4.54 ± 0.76	0.67 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB8	4.01 ± 0.88		2.61 ± 0.52		4.62 ± 0.74	0.68 ± 0.18	9 / 10 ( 90.0)	9 / 10 ( 90.0)
1	FC	3.35 ± 0.72		4.88 ± 1.60		6.54 ± 1.77	1.47 ± 0.42	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	3.29 ± 0.39		4.73 ± 1.12		6.36 ± 1.21	1.45 ± 0.32	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	3.37 ± 0.72		4.94 ± 1.64		6.62 ± 1.81	1.49 ± 0.44	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	3.31 ± 0.38		4.76 ± 1.12		6.39 ± 1.21	1.45 ± 0.31	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	3.39 ± 0.71		4.50 ± 1.62		6.66 ± 1.79	1.49 ± 0.44	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	3.42 ± 0.68		4.97 ± 1.74		6.67 ± 1.87	1.47 ± 0.48	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.26 ± 0.37		4.72 ± 1.05		6.33 ± 1.14	1.45 ± 0.30	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	3.44 ± 0.69		5.03 ± 1.71		6.74 ± 1.83	1.48 ± 0.48	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
3	FC	2.94 ± 0.50		6.55 ± 2.05		8.02 ± 2.18	2.23 ± 0.62	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	3.19 ± 0.50		7.15 ± 1.90		8.74 ± 2.03	2.26 ± 0.57	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	2.98 ± 0.50		6.74 ± 2.14		8.23 ± 2.26	2.28 ± 0.67	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	3.12 ± 0.50		6.93 ± 1.96		8.49 ± 2.08	2.23 ± 0.58	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	2.97 ± 0.45		6.74 ± 2.08		8.22 ± 2.21	2.29 ± 0.64	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	2.93 ± 0.50		6.60 ± 2.12		8.07 ± 2.24	2.26 ± 0.66	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.03 ± 0.48		6.77 ± 1.92		8.29 ± 2.03	2.25 ± 0.61	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	2.93 ± 0.50		6.80 ± 2.12		8.28 ± 2.24	2.33 ± 0.68	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
5	FC	2.49 ± 0.56		8.46 ± 1.94		9.58 ± 2.07	3.58 ± 1.23	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	2.51 ± 0.56		7.79 ± 2,08		8.96 ± 2.18	3.25 ± 1.23	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	2.50 ± 0.63		8.56 ± 2.20		9.76 ± 2.20	3.75 ± 1.83	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	2.48 ± 0.55		7.79 ± 2.08		8.93 ± 2.17	3.28 ± 1.23	9 / 9 ( 100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	2.48 ± 0.62		8.55 ± 2,20		9.74 ± 2.20	3.77 ± 1.83	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	2.44 ± 0.62		8.56 ± 2.23		9.75 ± 2.22	3.84 ± 1.86	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.14 ± 0.48		7.20 ± 1.87		8.77 ± 1.98	2.31 ± 0.59	10 / 10 (100/0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	2.45 ± 0.62		8.59 ± 2.23		9.76 ± 2.22	3.84 ± 1.86	10 /10 (100.0)	10 / 10 (100.0)

FC1: 냉동계육, CC2: 냉장계육, FP3: 냉동돈육, CP4: 냉장돈육, FGP5: 냉동분쇄돈육, FB6: 냉동우육, CB7: 냉장우육, FGB8: 냉동분쇄우육, 각 시료의 코메트세포 측정 평균치 ± 표준편차.(p<0.05), 시료 당 측정된 코메트세포 수(n=300), 전체 시료 수: 320(식육 종류 별 각 각 40개)

9.3 ∼ 9.17 (현행과 같음)

10. 식품표시 관련 시험법

10.1 유전자변형식품의 시험법

(현행과 같음)

10.1.1 ∼ 10.1.4 (현행과 같음)

10.1.5 정성시험

가. ∼ 나. (현행과 같음)

다. 시약 및 시액

1) (현행과 같음)

2) PCR용 시약의 조제

가) ∼ 다) (현행과 같음)

표 1. (현행과 같음)

표 2. 유전자변형 옥수수의 PCR 검사에 사용되는 프라이머와 프로브

목적	이벤트 (증폭산물크기)	프라이머/ 프로브	염기서열
내재성 유전자	옥수수 SSIIb1 (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 SSIIb3 (114 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 adh1 (135 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	옥수수 hmg (79 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
스크 리닝	CaMV P35S (101 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NOS (151 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
구조 유전자	Bt176 (100 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	Bt11 (127 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	GA21 (133 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	T25 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON810 (113 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NK603 (143 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	NK603 (108 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	TC1507 (103 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	TC1507 (58 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON863 (152 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON863 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS59122-7 (141 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS59122-7 (84 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88017 (100 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON88017 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR604 (142 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR604 (76 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON89034 (112 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR162 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MIR162 (92 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP098140-6 (147 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP098140-6 (80 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	3272 (141 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	3272 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87460 (85 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87460 (82 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	5307 (149 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	5307 (107 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87427 (152 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87427 (95 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS40278-9 (144 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DAS40278-9 (98 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP004114-3 (118 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	DP004114-3 (90 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87411 (112 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87411 (109 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON 87419 (184 bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON87419 (97bp)	(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
		(현행과 같음)	(현행과 같음)
	MON 87403 (175 bp)	87403-175G1	5'-CGC TGC GGA CAT CTA CAT TTT TG-3'
		87403-175G2	5'-GCT CAA GTG ATA AAT AGG TGG CAA CA-3'
	MON87403 (88bp)	87403 QF	5'-CTT TCT TTT TCT CCA TAT TGA CCA TCA TAC-3'
		87403 QR	5'-TAC TCC GGA ATG AGT GCT CTG TAT C-3'
		87403 QP	5'-FAM-TCA TTG CGA TCC ACA TTT CCC TAC ATG G-TAMRA-3'
	MZHG0JG (154 bp)	FE08186-MZHG-F	5'-ATT AGC TAA CGG CCA GGA TCG-3’
		FE30056-MZHG-R	5'-CAC CGT GAC ATG CTT AGC AAA A-3’
	MZHG0JG (81 bp)	MZHG0JG forward	5'-CAA CTA GCT AGA TTA ATT AAC GCA ATC TG-3’
		MZHG0JG reverse	5'-ATT TGT TTG CAA GGT GTG GGA-3’
		MZHG0JG probe	FAM-TTA AGT TGT CTA AGC GTC AAT TTG-BHQ-1

표 3. ∼ 표 4. (현행과 같음)

라. 시험조작(PCR)

(본문 생략)

① ---------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------MON87419, MON87403, MZHG0JG(이상 옥수수)

② ---------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------MON87419, MON87403(이상 옥수수)

③ ---------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------MON87419, MON87403(이상 옥수수)

④ ---------------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------MON87419,  MON87403(이상 옥수수)

1) ∼ 3) (현행과 같음)

마. (현행과 같음)

바. 분석 결과의 판정 및 처리

1) ∼ 2) (현행과 같음)

3) ----------------------- ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- MON87427, MZHG0JG가 있고, 35S 프로모터만 사용하는 것으로는 A2704-12, A5547-127, Bt176, T25, MON810, TC1507, DAS59122-7, DP004114-3, MON87411이 있으며, NOS 종결인자(terminator)만 사용하는 것으로는 FG72, GA21, MIR604,  MIR162, 3272, 5307이 있다.

4) (현행과 같음)

10.1.6 ∼ 10.1.14 (현행과 같음)

10.2 식품 조사처리 확인시험

10.2.1 유전자코메트 분석법(스크리닝검사법)

가. 시험법 적용범위

냉동 및 냉장 식육(우육, 돈육, 계육)에 적용한다.

나. 분석원리

이온화 조사처리는 세포의 유전자에 손상을 일으키며 이러한 유전자의 손상된 정도를 단일세포의 마이크로젤 전기영동법을 이용하여 코메트 세포를 측정함으로써 조사처리 여부를 검지하는 방법이다.

다. 장치 및 기구

1) 형광항체현미경(FITC Filter 494nm)

2) 전기영동장치

3) 코메트슬라이드

라. 시약 및 시액

1) 20 mM EDTA-PBS

2) Trypan blue stain

3) Low Melting Point Agarose

4) Lysis Solution : 2.5 M NaCl, 100 mM EDTA, 10 mM Tris base, 1% sodium lauryl sarcosinate, 0.01% TritonX-100, 10% Dimethyl Sulfoxide

5) TBE Buffer : 90 mM Tris-borate, 3 mM EDTA, pH 8.5

6) TE Buffer : 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5

7) SYBR Green 형광염색액

마. 검체조제

1) 시료의 표층부분을 제거한 후, 예리한 메스날 등을 사용하여 육중심부의 근육조직을 얇게 잘라내어 약 1 g 정도 채취하고 이를 교차하면서 잘게 세절 하여 다진 다음 냉장된 20 mM EDTA-PBS에 1:10의 비율(w/v)로 부드럽게 혼합한다.

2) 이를 200 ㎛ 및 100 ㎛ 나일론 여과포로 2회 여과한 다음 trypan blue stain(0.4%)용액 으로 염색하여 살아 있는 세포수를 계산하고 냉장 PBS로 약 105 cell/mL이 되도록  세포수를 조정한다.

바. 시험조작

1) 세포 부유액을 42℃로 유지된 0.5% Low Melting Point Agarose와 약 1:10(v/v) 비율로 혼합한 즉시 약 50 μL를 채취하여 신속하게 코메트슬라이드에 고르게 펴고 약 5℃ 냉암소에서 10분간 경화한다.

2) 이를 약 5℃ 냉암소에서 세포용해액(Lysis Solution)에 완전히 침지된 상태로 약 28분 동안 반응시킨다.

3) 코메트슬라이드와 경화된 agar 주변의 세포용해액을 흡수지로 신속하게 제거한 후, TBE Buffer(pH 8.5)에 완전히 침지하여 약 5분 동안 2회 반복하여 완충시킨다.

4) 즉시 코메트슬라이드를 TBE Buffer(pH 8.5)로 채워진 전기영동조에 넣어 완전히 침지시킨 상태에서 전압 1 V/㎝(예: 27㎝ 길이의 전기영동조의 경우 전압은 약 27V, 전류는 약 28 mA) 조건으로 19분 동안 전기영동 시킨다.

5) 전기영동 후 즉시 코메트슬라이드 위에 미리 준비한 형광염색용액 두 세 방울을 떨어뜨려 형광염색한다. 형광염색용액은 SYBR Green을 DMSO로 약 10배 희석하여 냉동(－20℃ 이하)보관하고 이를 사용 할 때에 TE Buffer로 희석 (1:1000, v/v)하여 사용한다.

사. 판정

1) 형광항체현미경(FITC Filter 494 nm) 100배에서 200배 확대 비율로 전체적인 코메트세포의 형태를 관찰하여 조사처리 여부를 일차적으로 판단한다(그림 1.).

가) 코메트세포(comet cell)의 형태가 원형 또는 난원형을 띠면서 comet tail 현상이 전체적으로 일정하게 나타나는 경우 조사처리된 것으로 판단한다.

나) 코메트세포(comet cell)의 형태가 원형 또는 난원형을 띠면서 코메트꼬리 (comet tail) 현상이 거의 나타나지 않는 경우 조사처리 되지 않은 것으로 판단한다.

그림 1. 비조사 육류(좌)와 조사된 육류(우)의 코메트세포(형광항체현미경 200배)

2) 1)의 가)과 같이 조사처리된 것으로 판단된 시료에 대해서는, 형광항체 현미경 200배에서 눈금자(1 ㎝ 길이, 눈금단위 10 ㎛)가 있는 대안렌즈를 사용하여 코메트슬라이드의 중앙부분에 위치한 comet cell(시료 하나에 75개 이상)의 Comet head 직경과 Comet tail(comet head 중간 부분에서 comet tail 끝 부분까지의 길이)의 길이를 신속하게 측정한 다음, comet tail의 길이에 대한 comet head 직경의 비율을 계산하여 다음의 기준에 따라 조사처리 여부를 판정한다(표 1.).

가) 1)의 가)에 해당되고 comet head의 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 1 kGy 조사 시료의 평균치 이상인 경우에는 양성으로 판정하고, 전자스핀공명법이나 기체크로마토그래프/질량분석법을 적용하여 조사처리 여부를 최종 판정한다.

나) 1)의 나)에 해당되고 comet head의 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 비 조사 시료의 평균치 이내인 경우(음성), 조사처리 되지 않은 것으로 판정한다.

다) 부분적인 comet tail 현상이 나타나고 comet head 직경에 대한 comet tail 길이의 비율이 육류 별로 비조사처리 시료의 평균치 이상에서 1 kGy 조사된 시료의 평균치 이하의 범위에 해당되는 경우 의양성으로 판정하고, 재 실험을 실시하여 다시 의양성으로 판정되는 경우에는 조사처리 되지 않은 것으로 판정한다.

표 1. 조사처리 육류의 코메트 세포 측정 및 흡수선량 평가 결과

선량(kGy)		코메트세포 (μm)					코메트꼬리/ 코메트머리	선량평가(%)	검지정확도(%)
		코메트머리 (직경)	코메트꼬리 (길이)		전체 길이			정확히 평가된 시료 수 / 시료 수(%)	정확히 검지된 시료 수 / 시료 수(%)
0	FC1	3.91 ± 0.91		2.63 ± 0.52		4.58 ± 0.73	0.71 ± 0.20	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CC2	3.94 ± 0.88		2.55 ± 0.51		4.52 ± 0.74	0.67 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP3	4.0 ± 0.88		2.62 ± 0.52		4.62 ± 0.73	0.68 ± 0.19	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP4	4.07 ± 0.90		2.57 ± 0.53		4.60 ± 0.18	0.66 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP5	4.04 ± 0.87		2.67 ± 0.57		4.69 ± 0.78	0.69 ± 0.19	9 / 10 ( 90.0)	9 / 10 (90.0)
	FB6	4.07 ± 0.88		2.63 ± 0.54		4.66 ± 0.76	0.67 ± 0.19	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB7	3.96 ± 0.89		2.56 ± 0.52		4.54 ± 0.76	0.67 ± 0.18	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB8	4.01 ± 0.88		2.61 ± 0.52		4.62 ± 0.74	0.68 ± 0.18	9 / 10 ( 90.0)	9 / 10 ( 90.0)
1	FC	3.35 ± 0.72		4.88 ± 1.60		6.54 ± 1.77	1.47 ± 0.42	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	3.29 ± 0.39		4.73 ± 1.12		6.36 ± 1.21	1.45 ± 0.32	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	3.37 ± 0.72		4.94 ± 1.64		6.62 ± 1.81	1.49 ± 0.44	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	3.31 ± 0.38		4.76 ± 1.12		6.39 ± 1.21	1.45 ± 0.31	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	3.39 ± 0.71		4.50 ± 1.62		6.66 ± 1.79	1.49 ± 0.44	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	3.42 ± 0.68		4.97 ± 1.74		6.67 ± 1.87	1.47 ± 0.48	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.26 ± 0.37		4.72 ± 1.05		6.33 ± 1.14	1.45 ± 0.30	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	3.44 ± 0.69		5.03 ± 1.71		6.74 ± 1.83	1.48 ± 0.48	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
3	FC	2.94 ± 0.50		6.55 ± 2.05		8.02 ± 2.18	2.23 ± 0.62	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	3.19 ± 0.50		7.15 ± 1.90		8.74 ± 2.03	2.26 ± 0.57	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	2.98 ± 0.50		6.74 ± 2.14		8.23 ± 2.26	2.28 ± 0.67	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	3.12 ± 0.50		6.93 ± 1.96		8.49 ± 2.08	2.23 ± 0.58	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	2.97 ± 0.45		6.74 ± 2.08		8.22 ± 2.21	2.29 ± 0.64	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	2.93 ± 0.50		6.60 ± 2.12		8.07 ± 2.24	2.26 ± 0.66	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.03 ± 0.48		6.77 ± 1.92		8.29 ± 2.03	2.25 ± 0.61	9 / 9 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	2.93 ± 0.50		6.80 ± 2.12		8.28 ± 2.24	2.33 ± 0.68	9 / 10 (90.0)	10 / 10 (100.0)
5	FC	2.49 ± 0.56		8.46 ± 1.94		9.58 ± 2.07	3.58 ± 1.23	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CC	2.51 ± 0.56		7.79 ± 2,08		8.96 ± 2.18	3.25 ± 1.23	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FP	2.50 ± 0.63		8.56 ± 2.20		9.76 ± 2.20	3.75 ± 1.83	9 / 10 ( 90.0)	10 / 10 (100.0)
	CP	2.48 ± 0.55		7.79 ± 2.08		8.93 ± 2.17	3.28 ± 1.23	9 / 9 ( 100.0)	10 / 10 (100.0)
	FGP	2.48 ± 0.62		8.55 ± 2,20		9.74 ± 2.20	3.77 ± 1.83	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	FB	2.44 ± 0.62		8.56 ± 2.23		9.75 ± 2.22	3.84 ± 1.86	10 / 10 (100.0)	10 / 10 (100.0)
	CB	3.14 ± 0.48		7.20 ± 1.87		8.77 ± 1.98	2.31 ± 0.59	10 / 10 (100/0)	10 / 10 (100.0)
	FGB	2.45 ± 0.62		8.59 ± 2.23		9.76 ± 2.22	3.84 ± 1.86	10 /10 (100.0)	10 / 10 (100.0)

FC1: 냉동계육, CC2: 냉장계육, FP3: 냉동돈육, CP4: 냉장돈육, FGP5: 냉동분쇄돈육, FB6: 냉동우육, CB7: 냉장우육, FGB8: 냉동분쇄우육, 각 시료의 코메트세포 측정 평균치 ± 표준편차.(p<0.05), 시료 당 측정된 코메트세포 수(n=300), 전체 시료 수: 320(식육 종류 별 각 각 40개)

10.2.2 광자극발광법(Photostimulated Luminescence, PSL)

가. (생  략)

나. 분석원리

식품에 혼입된 이물질인 광물질의 발광 특성을 이용하는 방법으로서 광물질은 방사선 조사에 의하여 에너지가 저장되고 일정온도의 적외선에 노출되면 에너지를 방출하는데 이때 방출하는 빛의 양을 측정하여 방사선 조사여부를 판정하는 방법이다.

다. 장치 및 기구

1) ～ 3) (생  략)

라. 표준검체

1) 조사검체：5～10 kGy사이의 선량으로 방사선 조사된 파프리카분말 250 g

2) 비조사검체：방사선 조사되지 않은 파프리카분말 250 g

마. ～ 바. (생  략)

사. 판정

1) 일반적으로 광자극발광법(PSL)은 방사선조사 여부를 스크리닝할 때 사용하는 방법으로서 측정값이 T1(700 count/60초) 미만이면 음성대조시료(Negative, 방사선이 조사되지 않은 검체)로 판정하고, T2(5,000 count/60초) 초과이면 양성검체(Positive, 방사선이 조사된 검체)로 한다.

2) 측정값이 T1～T2의 값을 나타내면 중간검체(Intermediate, 방사선 조사여부를 판단할 수 없는 검체)로 한다.

3) 양성검체와 중간검체는 최종 확인시험으로 8.2.2 열발광법에 따라 시험하여 그 결과의 판정에 따른다.

10.2.2 광자극발광법(Photostimulated Luminescence, PSL)

가. (현행과 같음)

나. 분석원리

-------------------- ------------------------------------------ 조사처리에 ---------------------- ---------------------------------------------- ----------------------------------- 조사처리 여부를 ------------.

다. 장치 및 기구

1) ～ 3) (현행과 같음)

라. 표준검체

1) 조사검체：5～10 kGy사이의 선량으로 조사처리된 파프리카분말 250 g

2)비조사검체：조사처리 되지 않은 파프리카분말 250 g

마. ～ 바. (현행과 같음)

사. 판정

1) ------------------------- ---------조사처리 여부를 --- -------------------------------------------------- -----------------------  ----------- 조사처리 되지 않은 검체) ------------------- -------------------------------(Positive, 조사처리된 검체)-------.

2) ------------------------ --------------(Intermediate, 조사처리 여부를 --------- ----------------.

3) ----------------------- ---------- 10.2.3 열발광법에 ------------------------------------.

10.2.3 열발광법(Thermoluminescence, TL)

가. 시험법 적용범위

1) (생  략)

2) 후추, 육두구, 정향, 밤, 버섯, 감자, 건조채소류, 향신료조제품, 곡류, 두류, 어류분말, 패류분말, 갑각류분말 된장분말, 고추장분말, 간장분말, 전분, 효모․효소식품, 알로에분말, 인삼(홍삼 포함) 제품류, 복합조미식품, 조류식품, 분말차, 침출차, 소스류, 2종 이상이 혼합된 식품과 광물질(silicate minerals)이 분리가 가능한 식품에 적용한다.

나. 분석원리

열발광법(ThermoLuminescence, TL)은 식품에 혼입된 이물질인 광물질의 발광 특성을 이용하는 방법으로서 광물질은 방사선 조사에 의하여 에너지가 저장되고 일정온도의 열에 노출되면 에너지를 방출하는데 이때 방출하는 빛의 양을 측정하여 방사선 조사여부를 판정하는 방법이다.

다. 장치 및 기구

1) ～ 6) (생  략)

7) 방사선 조사장치 (60Co)

라. ～ 사. (생  략)

아. 판정

1) 글로우곡선(glow curve)의 모양, 글로우곡선(glow curve)이 나타나는 온도범위 및 TL 비로서 방사선 조사여부를 판정한다.

2) 방사선 조사되지 않은 검체는 특징적인 글로우곡선(glow curve)을 나타내지 않거나 300℃ 이상에서 자연방사능에 의한 곡선을 나타낸다.

3) 방사선 조사된 검체는 150～250℃에서 최대강도를 보이는 글로우곡선(glow curve)을 나타낸다.

4) TL 비가 0.1 이상인 것은 방사선 조사된 것으로, 0.1 미만인 것은 방사선 조사되지 않은 것으로 판정한다. 단, 2개 이상의 원료가 혼합되어 있는 제품의 경우 그 중 1개 또는 그 이상의 원료들이 방사선 조사되었을 때 TL비가 0.1이하로 나타나 조사되지 않은 것으로 보일 수 있으나, 글로우1의 모양이 방사선 조사된 것으로 나타날 경우 방사선 조사된 것으로 판정한다.

자. (생  략)

10.2.3 열발광법(Thermoluminescence, TL)

가. 시험법 적용범위

1) (현행과 같음)

2) 후추, 육두구, 정향, 밤, 버섯(건조 포함), 감자, 건조채소류(분말 포함), 향신료조제품, 곡류(분말 포함), 두류(분말 포함), 어류분말, 패류분말, 갑각류분말, 된장분말, 고추장분말, 간장분말, 전분, 효모식품, 효소식품, 알로에분말, 인삼(홍삼 포함) 제품류, 복합조미식품, 조류식품, 조미건어포류, 특수의료용도등식품, 분말차, 침출차, 소스류, 2종 이상이 혼합된 식품과 광물질(silicate minerals)이 분리가 가능한 식품에 적용한다.

나. 분석원리

-------------------- ---------------------------------------------- -------------------------------------------- 조사처리에 -------------------- ---------------------------------------------- ----------------------------------- 조사처리 여부를 ------------------.

다. 장치 및 기구

1) ～ 6) (현행과 같음)

7) 재조사 처리 장치 (60Co, 전자선발생장치)

라. ～ 사. (현행과 같음)

아. 판정

1) ----------------------- -------------------- ---------------------------------- 조사처리 여부를 판정한다.

2) 조사처리 되지 않은 검체는 ------------------------- --------------------------------------------------- ------------.

3) 조사처리된 검체는 -------- -------------------- --------------------------------.

4) ----------------------- 조사처리된 것으로, 0.1 미만인 것은 조사처리 되지 않은 것으로 판정한다. ----------  ---------------------------------------------- ---------------- 조사처리  되었을 때 ---------------- ------------------------------------------- -------------- 조사처리된 것으로 나타날 경우 조사처리된 것으로 ---------.

자. (현행과 같음)

10.2.4 전자스핀공명법(Electron Spin Resonance spectroscopy, ESR)

가. 시험법 적용범위

1) ～ 3) (생  략)

나. 분석원리

뼈, 셀룰로오스 및 결정형 당(crystalline sugar)을 함유한 식품에 잔존하는 방사선 조사로 생긴 자유라디칼(free radical)을 분광학적으로 측정하는 방법으로서, 자장에 의하여 전자가 공명한 후 방출하는 에너지의 차이를 측정하여 방사선 조사여부를 판정하는 방법이다.

다. ～ 마. (생  략)

바. 판정

1) 뼈를 함유한 식품에서 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite, [Ca10(PO4)6(OH)2]) 유래의 라디칼에 의한 g 값이 2.001～2.003(g1)과 1.997～1.999(g2)인 비대칭 신호가 나타나면 방사선 조사된 것으로 판정한다.

그림 1. 방사선이 조사되지 않은  소고기 뼈의 ESR 스펙트럼

그림 2. 7 kGy의 선량이 조사된 소고기 뼈의 ESR 스펙트럼

2) 셀룰로오스를 함유한 비조사 식품에서 나타나는 중심부의 신호 왼쪽(저자장)과 오른쪽(고자장)에 셀룰로오스 라디칼에 의해서 생성되는 한쌍의 피크가 6.0 mT의 공간을 두고 나타나면 방사선 조사된 것으로 판정한다.

그림 3. 방사선이 조사되지 않은 피스타치오의 ESR 스펙트럼

그림 4. 1 kGy의 선량이 조사된 피스타치오의 ESR 스펙트럼

3) 결정형 당을 함유한 비조사 식품에서 보이지 않던 다성분(multi component) ESR 신호(signal 1, 2, 3......)가 나타나면 방사선 조사된 것으로 판정한다.

그림 5. 방사선이 조사되지 않은 건포도의 ESR 스펙트럼

그림 6. 1 kGy의 선량이 조사된 건포도의 ESR 스펙트럼

10.2.4 전자스핀공명법(Electron Spin Resonance spectroscopy, ESR)

가. 시험법 적용범위

1) ～ 3) (현행과 같음)

나. 분석원리

------------------------

------------------------ --------------- 조사처리로 ------------------------ ----------------------------------------------------------------------------------------------- 조사처리  여부를 ------------.

다. ～ 마. (현행과 같음)

바. 판정

1) ----------------------- ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 조사처리된 것으로 판정한다.

그림 1. 조사처리 되지 않은 소고기 뼈의 ESR 스펙트럼

그림 2. 7 kGy의 선량이 조사된 소고기 뼈의 ESR 스펙트럼

2) ----------------------- --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 조사처리된 것으로 -- ----.

그림 3. 조사처리 되지 않은 피스타치오의 ESR 스펙트럼

그림 4. 1 kGy의 선량이 조사된 피스타치오의 ESR 스펙트럼

3) ------------------------- ----------------------------------------------------------------------------조사처리된 것으로 --------.

그림 5. 조사처리 되지 않은 건포도의 ESR 스펙트럼

그림 6. 1 kGy의 선량이 조사된 건포도의 ESR 스펙트럼

10.2.5 기체크로마토그래프/질량분석법(Gas chromatography/Mass spectrometry)

가. (생  략)

나. 분석원리

기체크로마토그래프/질량분석법(Gas chromatography/ Mass spectrometry)은 지방질 식품에서 방사선 조사로 생성된 탄화수소(원래의 지방산보다 탄소수가 1개 적거나, 2개 적으면서 첫 번째 탄소위치에 새로운 이중결합을 가진 탄화수소)를 측정하여 방사선 조사여부를 판정하는 방법이다.

다. ～ 사. (생  략)

아. 판정

지방을 방사선 조사시키면 2 가지 형태의 탄화수소 (Cn-1 탄화수소와 Cn-2:1 탄화수소)가 생성되는데 이들의 존재여부로서 방사선 조사여부를 판단하며, 식육 등의 경우 검지마커인  8-heptadecene (C17:1),  1,7-hexadecadiene (C16:2)이 존재하면, 난분의 경우 1,7-hexadecadiene (C16:2)이   존재하면 방사선 조사된 것으로 판단한다.

10.3 ～ 10.5 (생  략)

10.2.5 기체크로마토그래프/질량분석법(Gas chromatography/Mass spectrometry)

가. (현행과 같음)

나. 분석원리

-----------------------  ----------------------------------------------------- 조사처리로 생성된 ---------- ------------------------- ------------------------------------------------------------------------------- 조사처리 여부를 ------------ ---------.

다. ～ 사. (현행과 같음)

아. 판정

지방을 조사처리하면 2 가지 ------------------------- ------------------------------------------------- 조사처리 여부를 --------------  ------------------------- ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- 조사처리된 것으로 판단한다.

10.3 ～ 10.5 (현행과 같음)

11. ～ 12. (생  략)

11. ～ 12. (현행과 같음)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
A가000100 〜 A가014200	(생 략)
A가014300	검정콩	흑두(黑豆), 서리태, 대두, Black Beans	Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.	잎, 씨앗
A가014400 〜 A가014500	(생 략)
A가014600	겐티아나	-	Gentiana lutea Linné	뿌리 및 뿌리줄기※(겐티아나)
A가014700 〜 A가038800	(생 략)
A가038900	녹두	안두(安豆), 길두(吉豆), Green gram, Mung bean	Phaseolus radiatus L.	씨앗, 싹
A가039000 〜 A가049500	(생 략)
A가049600	돌콩	쥐눈이콩, 검정콩, 적은콩, 갱미두, 서목태, Wild soybean	Glycine soja Sieb. & Zucc. / Glycine ussuriensis Regel & Maack	씨앗
A가049700 〜 A가052200	(생 략)
A가052300	들깨	수임, 임자, Perilla	Perilla fruescens var. japonica (Hassk.) H. Hara / Melissa maxima Ard. / Perilla avium Dunn	잎, 씨앗
A가052400 〜 A가059300	(생 략)
A가059400	루이보스	Rooibos	Aspalathus lineraris	잎
A가059500 〜 A가094800	(생 략)
A가094900	사향초	백리향, Five-rib thyme, Fiveribbed thyme	Thymus quinquecostatus Celak.	전초※(사향초)
A가095000 〜 A가105000	(생 략)
A가105100	소나무	Korean red pine	Pinus densiflora Sieb & Zucc.	순, 줄기, 가지, 잎, 꽃가루
A가105200 〜 A가118400	(생 략)
A가118500	알로에사포나리아	-	Aloe saponaria Haw	잎(껍질제외)
A가118600	알로에아보레센스	알로에 아르보레스켄스, Aloe mutabilis	Aloe arborescens Miller	잎(껍질제외)
A가118700 〜 A가131800	(생 략)
A가131900	용안육	Longan	Dimocarpus longan Loureiro	헛씨껍질※(용안육)
A가132000 〜 A가184900	(생 략)
A가185000	홍화	잇꽃, False saffron, bastard saffron, Safflower	Carthamus tinctorius	잎, 씨앗
A가185100 〜 A가307100	(생 략)
A가307200	Rooibos tea	-	Aspalathus linearis	잎
A가307300 ∼ A가367400	(생 략)

2. 동물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위
A나000100 〜 A나004100	(생 략)
A나004200	갈색거저리유충	밀웜, Mealworm	Tenebrio molitor L.	-
A나004300 〜 A나056500	(생 략)
A나056600	쌍별귀뚜라미	Two-spotted cricket	Gryllus bimaculatus	-
A나056700 〜 A나066200	(생 략)
A나066300	장수풍뎅이 유충	-	Allomyrina dichotoma	-
A나066400 〜 A나090900	(생 략)
A나091000	흰점박이꽃무지유충	-	Protaetia brevitarsis	-
A나091100 ∼ A나095600	(생 략)

3. 미생물

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	비고
A다000100 ∼ A다007000	(생 략)

4. 기타

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위
A라000100 ∼ A라001500	(생 략)

[별표 1] “식품에 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)
A가000100 〜 A가014200	(현행과 같음)
A가014300	대두	백태, 청태, 노란콩, 검정콩, 흑두(黑豆), 서리태, Black Beans	Glycine max (L.) Merr. / Dolichos soja L. / Glycine hispida (Moench) Maxim.	잎, 씨앗
A가014400 〜 A가014500	(현행과 같음)
A가014600	큰노랑용담	겐티아나	Gentiana lutea Linné	뿌리 및 뿌리줄기※(겐티아나)
A가014700 〜 A가038800	(현행과 같음)
A가038900	녹두	안두(安豆), 길두(吉豆), Green gram, Mung bean	Vigna radiata (L.) R.Wilczek / Phaseolus radiatus L. / Azukia radiata Ohwi	씨앗, 싹
A가039000 〜 A가049500	(현행과 같음)
A가049600	돌콩	쥐눈이콩, 적은콩, 갱미두, 서목태, Wild soybean	Glycine soja Sieb. & Zucc. / Glycine ussuriensis Regel & Maack	씨앗
A가049700 〜 A가052200	(현행과 같음)
A가052300	들깨	수임, 임자, Perilla	Perilla frutescens var. japonica (Hassk.) H. Hara / Melissa maxima Ard. / Perilla avium Dunn	잎, 씨앗
A가052400 〜 A가059300	(현행과 같음)
A가059400	루이보스	Rooibos, Rooibos tea	Aspalathus linearis (Burm. f.) R. Dahlgren	잎
A가059500 〜 A가094800	(현행과 같음)
A가094900	백리향	사향초, Five-rib thyme, Fiveribbed thyme	Thymus quinquecostatus Celak.	전초※(사향초)
A가095000 〜 A가105000	(현행과 같음)
A가105100	소나무	Korean red pine	Pinus densiflora Sieb & Zucc.	순, 줄기, 나무껍질, 가지, 잎, 꽃가루
A가105200 〜 A가118400	(현행과 같음)
A가118500	알로에사포나리아	-	Aloe saponaria Haw	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함) 제외]
A가118600	알로에아보레센스	알로에 아르보레스켄스, Aloe mutabilis	Aloe arborescens Miller	잎[껍질(쥬스/라텍스 포함) 제외]
A가118700 〜 A가131800	(현행과 같음)
A가131900	용안	용안육, Longan	Dimocarpus longan Loureiro	헛씨껍질※(용안육)
A가132000 〜 A가184900	(현행과 같음)
A가185000	잇꽃	홍화, False saffron, bastard saffron, Safflower	Carthamus tinctorius	잎, 씨앗
A가185100 〜 A가307100	(현행과 같음)
(삭제 : A가059400와 통합)
A가307300 ∼ A가367400	(현행과 같음)

2. 동물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위
A나000100 〜 A나004100	(현행과 같음)
(삭제 : [별표3]으로 이동)
A나004300 〜 A나056500	(현행과 같음)
(삭제 : [별표3]으로 이동)
A나056700 〜 A나066200	(현행과 같음)
(삭제 : [별표3]으로 이동)
A나066400 〜 A나090900	(현행과 같음)
(삭제 : [별표3]으로 이동)
A나091100 ∼ A나095600	(현행과 같음)

3. 미생물

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	비고
A다000100 ∼ A다007000	(현행과 같음)

4. 기타

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위
A라000100 ∼ A라001500	(현행과 같음)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가005900	(생 략)
B가006000	산조인	-	산조 Zizyphus jujuba Miller var. spinosa Hu ex H. F. Chou	산대추 씨앗※(산조인)	-
B가006100 ∼ B가008600	(생 략)
B가008700	옻나무	칠목, Chinese Sumac	Rhus verniciflua Stokes	줄기, 가지	동 공전 제2, 2, 1), (18) 옻나무의 사용기준에 따름
B가008800 ∼ B가009500	(생 략)
B가009600	인동	금은화	Lonicera japonica Thunberg	꽃봉오리※(금은화), 잎 및 줄기※(인동)	-
B가009700 ∼ B가010400	(생 략)
B가010500	죽력	솜대, 왕대	Phyllostachys nigra Munro var. henonis Stapf / Phyllostachys bambusoides Sieb. et Zucc.	마디줄기를 태울 때 유출되는 즙액※(죽력)	주류의 원료로만 사용
B가010600 ∼ B가014900	(생 략)

2. 동물성

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
B나000100 ∼ B나000800	(생 략)

3. 미생물

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 조건
B다000100 ∼ B다000700	(생 략)
B다000800	Corynebacterium glutamicum	-	Corynebacterium glutamicum	-
B다000900 ∼ B다003100	(생 략)

4. 기타

품목 번호	품목명	이명 또는 영명	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
B라000100 ∼ B라001200	(생 략)

[별표 2] “식품에 제한적으로 사용할 수 있는 원료”의 목록

1. 식물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위 (생약명)	사용 조건
B가000100 ∼ B가005900	(현행과 같음)
B가006000	산조	산조인	Zizyphus jujuba Miller var. spinosa Hu ex H. F. Chou	산대추 씨앗※(산조인)	-
B가006100 ∼ B가008600	(현행과 같음)
B가008700	옻나무	칠목, Chinese Sumac	Rhus verniciflua Stokes	줄기, 가지	동 공전 제2, 1, 1), (10) 옻나무의 사용기준에 따름
B가008800 ∼ B가009500	(현행과 같음)
B가009600	인동덩굴	금은화, 인동, 눙박나무, Golden-and-silver flower	Lonicera japonica Thunberg	꽃봉오리※(금은화), 잎 및 줄기※(인동)	-
B가009700 ∼ B가010400	(현행과 같음)
B가010500	죽력	솜대, 왕대	Phyllostachys nigra Munro var. henonis Stapf / Phyllostachys bambusoides Sieb. et Zucc.	줄기에 열을 가할 때 유출되는 즙액※(죽력)	주류의 원료로만 사용
B가010600 ∼ B가014900	(현행과 같음)

2. 동물성

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
B나000100 ∼ B나000800	(현행과 같음)

3. 미생물

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성 사용	사용 조건
B다000100 ∼ B다000700	(현행과 같음)
B다000800	Corynebacterium glutamicum	-	Corynebacterium glutamicum	복합조미식품 제조 및 알룰로오스 제조에 한함
B다000900 ∼ B다003100	(현행과 같음)

4. 기타

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위	사용 조건
B라000100 ∼ B라001200	(현행과 같음)

<신  설>

[별표 3] “한시적 기준‧규격에서 전환된 원료”의 목록

고유 번호	명칭	기타명칭 또는 시장명칭	학명 또는 특성	사용 부위	제조/사용 조건
C000100	갈색거저리유충	밀웜, Mealworm	Tenebrio molitor L.	-	-
C000200	쌍별귀뚜라미	Two-spotted cricket	Gryllus bimaculatus	-	-
C000300	장수풍뎅이 유충	-	Allomyrina dichotoma	-	-
C000400	흰점박이꽃무지유충	-	Protaetia brevitarsis	-	-
C000500	알룰로오스	알룰로스, allulose	-	-	과당류를 알칼리화 또는 효소적 방법으로 제조한 것으로 제조과정에 사용된 미생물은 최종제품에 잔류하지 않아야 함

[별표 3] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (98) (생   략)

(99) 이사-디(2,4-D, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid)

(생   략)

면실	0.1

(100) ∼ (163) (생   략)

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(생   략)

아몬드	0.2

호두	0.2

견과류	0.2

(165) ∼ (168) (생   략)

(169) 펜코나졸(Penconazole)

(생   략)

포도	0.5T

(170) ∼ (258) (생   략)

(259) 피리메타닐(Pyrimethanil)

(생   략)

배추	0.2

(260) ∼ (470) (생   략)

주1. ∼ 주7. (생   략)

주8. 별표 3에서 농약 잔류허용기준의 설정되어 있는 농산물 중 ‘대두’는 수확 후 건조된 상태를 말하며, ‘대두(생)’은 건조되지 않은 상태를 말한다.

주9. (생   략)

[별표 4] 농산물의 농약 잔류허용기준

(1) ∼ (98) (현행과 같음)

(99) 이사-디(2,4-D, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid)

(현행과 같음)

면실	0.08†

(100) ∼ (163) (현행과 같음)

(164) 펜발러레이트(Fenvalerate)

(현행과 같음)

<삭    제>

<삭    제>

견과류	0.15†

(165) ∼ (168) (현행과 같음)

(169) 펜코나졸(Penconazole)

(현행과 같음)

포도	0.2†

(170) ∼ (258) (현행과 같음)

(259) 피리메타닐(Pyrimethanil)

(현행과 같음)

배추	0.1

(260) ∼ (470) (현행과 같음)

주1. ∼ 주7. (현행과 같음)

주8. 별표 4------------------

--------------------------

--------------------------

--------------------------

----------.

주9. (현행과 같음)

[별표 4] ～ [별표 6](생   략)

[별표 5] ～ [별표 7] (현행과 같음)